《项目五TLC技术》PPT课件

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1、项目五薄层色谱法TLCThinLayerChromatography科学家在研究植物叶子的色素成分时，将植物叶子的萃取物倒入填有碳酸钙的直立玻璃管内，然后加入石油醚使其自由流下，结果色素中各组分互相分离形成各种不同颜色的谱带。按光谱的命名方式，这种方法因此得名为色谱法。一、色谱在色谱法中，静止不动的一相（固体或液体）称为固定相（stationaryphase）；运动的一相（一般是气体或液体）称为流动相（mobilephase）.二、薄层色谱构成1、固定相硅胶—为使用最广泛的薄层材料氧化铝—有碱性、中性、酸性硅藻土—为化学中性吸附剂纤维素—天然多糖类聚酰胺—为特殊类型有机薄层

2、材料，对能形成氢键的物质有特别的选择性。2、载板－玻璃板放在饱和碳酸钠溶液中浸泡数小时，除去玻璃表面的油污。然后充分漂洗干净，干燥，置干燥器中备用。要求光滑、平整、洗净后不附水珠。3、黏结剂无机黏结剂－石膏（硫酸钙），添加石膏的吸附剂以字母“G”表示。没有黏结剂的吸附剂以字母“H”表示。有机黏结剂——羧甲基纤维素钠（CMC）、淀粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。其特点是薄层强度高、使用方便，但不能用浓硫酸作显色剂。4、荧光黏结剂在吸附剂中添加某种荧光指示剂，常用的荧光指示剂在254nm紫外光下发蓝色荧光的有钠荧光素、硫化镉、阴极绿等。在366nm有荧光的指示剂如彩蓝等。含有荧光

3、指示剂的商品吸附剂以“F”表示，并以下标注明其激发光波长。例硅胶HF254薄层板活化（可直接用商品TLC，不需活化）涂布后的薄层先在室温下晒干，在使用前置适当温度烘烤一定时间进行活化，然后置干燥器中备用。不同薄层活化条件略有不同，如：硅胶110℃1h氧化铝110℃30min三、TLC操作步骤制样－选择溶剂，并加热溶解少量样品（约0.01g即可）－要求选择溶解样品的溶剂有高度挥发性和尽可能非极性，否则易使斑点扩展。点样－用酒精灯拉细的毛细管蘸取少量样品溶液点在硅胶板上，样品点应尽可能小。点样量应适中，过浓会引起斑点拖尾，分离度变差，以最小检测量的几倍～几十倍为宜。采用多次点样

4、法，第二次点加样应待前一次点样的溶剂挥发后再进行。同一快硅胶板上同时点多个样时，每个样需点在同一高度手工点样工具：定容玻璃毛细管（1–5ul）。展开多数采用直线形上行展开，薄层板水平角度以75为最佳。展开距离一般为10-15cm。直立式层析缸示意图1-层析缸；2-薄层板3-展开剂饱和蒸气；4-展开剂检测物理方法——紫外光下显示荧光或荧光淬灭检测化学方法——加化学试剂显色，要求显色稳定、持久、专属、灵敏、线性良好。斑点定位方法碘蒸气法——灵敏、简便，为通用显色法。将碘结晶放在密封的展开缸中，碘的升华，使缸内充满紫色的碘蒸气。将展开后的板挥干溶剂置碘缸中至薄层色谱上出现棕色斑

5、点。保留参数（Rf值）计算－概念：用来表征斑点位置的基本参数是保留因子，通常称作比移值，用Rf表示。－计算方法：Rf=Ls/L原点S参比样品LsL（前沿）Lr原点参比样品前沿四、流动相与展开体系选择液-固吸附－在该色谱中，溶质的保留和分离选择性决定于三个因素：溶解能力流动相溶质吸附剂相互作用竞争1、溶剂强度参数及溶剂选择溶剂的强度参数定义：溶剂强度参数用表示。流动相强度越高，表示它与吸附剂相互作用力强。溶质的Rf值就越大。为得到满意的分离，选用的流动相使溶质的Rf值在0.3–0.7之间为宜。溶剂强度也可用其在水中的溶解度参数来表示。一些常用溶剂的溶剂强度与溶解度参数溶

6、剂溶剂正己烷0.017.3石油醚0.028.2苯0.329.2乙醚0.387.4二氯甲烷0.429.6正丙醇0.8210.2正丁醇0.70/四氢呋喃0.579.1乙酸乙酯0.588.6氯仿0.409.1甲乙酮0.51/二氧六环0.569.8吡啶0.7110.4丙酮0.509.4乙醇0.88/乙酸1.0012.4二甲亚砜0.7512.8甲醇0.9512.9乙二醇1.1114.7甲酰胺/17.92、溶剂选择原则增加溶剂强度，则Rf值增大，但可能降低分离能力流动相中较强组分的体积比小于5%或大于50%，选择性最大。用乙醚或甲醇代替流动相中的一种较强组分，由于形成氢键可

7、改善选择性。若出现斑点拖尾，可向流动相中加少量水，或降低薄层活性，有利于改善分离。药物鉴别－采用标准对照法含量测定－主要用于中药有效成分的分析杂质检查－杂质对照品法－高低浓度法－药物标准品对照法五、应用杂质检查方法杂质对照品法（A）供试品自身对照法（高低浓度法）（B）对照物质法（C）样对样对样对ABC任务1、检验某样品的纯度样品1：溶解少量样品1进行薄层检测并计算Rf值溶剂：乙醇展开剂：石油醚：乙酸乙酯=4：6（体积比）任务2、混合物的分离样品2：溶解少量样品2进行薄层检测并计算Rf值溶剂：95%乙醇展开剂：石油醚