【生物技术】第二讲 植物组培的培养基 - 副本.ppt

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1、第二讲培养基目的要求：一、掌握培养基的种类及其特点三、掌握培养基的组成和其适宜剂量二、掌握MS培养基配制四、理解培养基筛选方法第一节培养基的种类和成分一、培养基种类▼二、培养基成分▼第二节培养基制备▼一、母液配制和保存二、培养基配制、分装和灭菌▼第三节培养基的选择▼一、单因子试验二、多因子试验三、逐步增减法四、广谱实验法一、培养基的种类1、根据其态相不同分为固体培养基与液体培养基。固体培养基是指加凝固剂的培养基。培养基中加入一定量的凝固剂，加热溶解后，分别装入常用的培养容器中冷却后即得到固体培养基。液体培养基是指不加凝固剂的培养基。培养基种类固体培养基液体

2、培养基▲营养分布均匀，生长整齐一致，但通气性差。通气性较好，便于操作，但营养分布不均，生长发育不整齐。二者比较2、根据培养物的培养过程培养基分为：初代培养基和继代培养基外植体：从植物体上取出的用于无菌培养的植物材料。植物材料：茎尖、茎段、花瓣、叶子、花药等初代培养：指用来第一次接种从植物体上分离下来的外植体过程。继代培养：对培养物(包括细胞、组织或其切段)通过更换新鲜培养基及不断切割或分离，进行连续多代的培养，就称为继代培养。3、根据其作用不同，培养基分为：诱导培养基增殖培养基生根培养基4、根据其营养水平不同，培养基可分为基本培养基和完全培养基。基本培养基

3、（就是通常称呼的培养基）主要有MS、White、N6、B5、改良MS、Heller、Nitsh、SH、Miller等。完全培养基就是基本培养基的基础上，根据试验的不同需要，附加一些物质，如生长调节物质和其他复杂有机物质等。常用培养基种类MS培养基B5培养基White培养基N6培养基KM-8P培养基★有机成分复杂，它包括了所有的单糖和维生素用于原生质体培养(包括原生质融合的培养)KM-8P培养基特点：N6培养基特点：1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计成分简单KNO3和(NH4)2SO4含量高广泛应用于小麦、水稻及其它植物的花药培养等White

4、培养基特点：1943年由Ｗhite为培养番茄根尖而设计的。1963年又作了改良，称作Ｗhite改良培养基。特点：无机盐含量较低适用：生根培养。B5培养基特点：含较低的铵双子叶植物尤其木本植物组培可选择MS培养基特点：无机盐、离子浓度高，硝酸盐含量较高。▲MS培养基是目前应用最多最普遍的培养基。无机盐的浓度较高，能保证组织培生长所需的矿物质营养。并且因为离子浓度高，在配制、贮存、消毒过程中，即使有些成分略有出入，也不致影响培养基中的离子平衡二、培养基成分水植物激素无机盐有机物培养体支持材料辅助性物质▲一、无机盐▲氮枝叶生长需要氮素，缺氮老叶先发黄；氮过量，枝

5、叶过度茂盛。磷缺磷，植株生长缓慢，老叶暗紫色。钾促进花卉生长健壮，增强抗性，茎秆挺拔。缺钾，叶尖、叶缘枯焦，叶片呈皱曲状，老叶发黄或火烧状。钴缺钴，叶片失绿而卷曲，整个叶片向上弯曲凋枯。二、有机物维　生　素肌　　　醇氨　基　酸天然复合物椰子汁（CM）酵母浸出液（YE)水解酪蛋白（CH)碳水化合物马铃薯汁液其　　　它▲碳水化合物选用种类：蔗糖（或葡萄糖、果糖）等蔗糖浓度：2%～3%，胚培养为4%～15%大生产时可用白糖▲糖在培养基的作用：1）为细胞提供合成新物质的碳骨架2）为细胞的呼吸代谢提供底物和能量3）维持渗透压种类：VB1（盐酸硫胺素）、VB6（盐酸吡

6、哆醇）、VB3（烟酸）、Vc（抗坏血酸浓度：0.1－1.0mg/L作用：VB1促愈伤组织产生，提高活力VB6促根生长Vc防组织褐变VB3与植物代谢和胚的发育有关系维　生　素▲氨基酸：甘氨酸、精氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等等。因培养基的种类不同，其种类和浓度不同。肌醇：又称环己六醇，在糖类的转化中起作用名称分子量溶解性质性质蔗糖342.30溶于水、乙醇无变旋现象山梨糖180.16溶于水甜味与蔗糖相似葡萄糖180.16溶于水有变旋现象，以游离态或磷酯形式存在果糖180.16溶于水、乙醇有变旋现象，甜度高于蔗糖盐酸硫胺素（VB1）337.

7、28溶于水、乙醇、甘油受高温影响小，可高温消毒核黄素（VB2）376.37溶于无水乙醇、微溶于水等电点PH=6.0，碱性溶液中易变质，光能加速变质盐酸吡哆素（VB6）205.64溶于水、乙醇对光、空气、热稳定是转氨酶的辅酶钴胺素（VB12）1355.42溶于水、乙醇受高温影响小，可高温消毒，参与丝氨酸转变为甘氨酸过程烟酸（VPP）123.11极易溶于水、乙醇对空气、光、热、PH值稳定生物素（VH）244.31溶于水、乙醇对空气温度稳定叶酸（VM）441.40易溶于乙酸、NaOH、微溶于水参与生物甲基化作用抗坏血酸（VC）176.12极易溶于水有较强的还原能

8、力，可做抗氧化剂用，参与酪氨酸代谢及色氨酸的羟基化作用肌醇180.