生化实验酶的特性1.ppt

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1、实验八影响酶促反应的因素——温度、pH、激活剂及抑制剂一、实验目的:1、了解温度、pH、激活剂及抑制剂对酶活力的影响。2、学习测定酶的最适温度、最适pH的方法。二、内容：本实验由酶的专一性；温度对酶活力的影响；pH对酶活力的影响；酶的激活剂及抑制剂；4组实验组成。淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色。在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。（一）酶的专一性1、原理酶具有高度的专一性。本实验以唾液淀粉酶对

2、淀粉和蔗糖的作用为例，来说明酶的专一性。淀粉和蔗糖无还原性。唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性的麦芽糖，但不能催化蔗糖的水解。用Benedict试剂检查糖的还原性。醛或酮糖与Benedict试剂（CuSO4、柠檬酸和Na2CO3）一起加热时，溶液的蓝色消失，同时生成Cu2O的砖红色沉淀。能与这些试剂发生反应的糖叫还原糖，还原糖分子中必定有半缩醛羟基，它能变为链状结构，即有-CHO或>C=O，而不与这些试剂反应的糖为非还原糖，其分子中无半缩醛羟基。如苷中就没有半缩醛-OH，所以它在碱性不能被氧化。2、操作：比较各管的现象，并解释之。

3、12340.1%淀粉溶液ml2.0——2.0——0.1%蔗糖溶液ml——2.0——2.0稀释的唾液ml0.50.5蒸馏水ml0.50.5————37℃恒温反应10min,分别取2滴反应液在白瓷板中，滴加2滴KI-I2试剂，观察现象现象1本尼迪特试剂ml0.10.10.10.1沸水浴min5555现象2（二）温度对酶活力的影响原理酶的催化作用受温度的影响。在最适温度下，酶的反应速度最高。大多数动物酶的最适温度为37-40℃，植物酶的最适温度为50-60℃。酶对温度的稳定性与其存在形式有关。有些酶的干燥制剂，虽加热到100℃，其活

4、性并无明显改变，但在100℃的溶液中却很快完全失去活性。低温能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。操作：取5支试管，编号后按下表加入试剂123451%淀粉ml1.01.01.01.01.0温度预处理37℃0℃100℃0℃100℃稀释的唾液ml0.50.50.50.50.537℃5min*0℃5min100℃5min0℃5min37℃5min100℃5min37℃5min*此时间为基准时间，实验前以1号试管测定反应基准时间，即每隔10s滴加到已有KI-I2试剂的白瓷板中，观察颜色变化，直到遇碘不呈色时，记录反应所用时间（例如5m

5、in）再向各管加碘液2滴，摇匀后观察各管颜色，并解释之。（二）pH对酶活性的影响1、原理酶的活力受环境pH的影响极为显著。不同酶的最适pH值不同。本实验观察pH对唾液淀粉酶活性的影响，唾液淀粉酶的最适pH约为6.8。2、操作取5支试管，按下表加入试剂并操作123450.2MNa2HPO4ml0.160.561.472.432.840.2MNaH2PO4ml2.842.441.530.570.16pH5.66.26.87.48.01%淀粉ml1.01.01.01.01.0混匀，37℃2min稀释的唾液0.50.50.50.50.

6、5加酶后，迅速混匀，置37℃水浴保温，每隔1min从3号管中取溶液2滴加到已有KI-I2试剂的白瓷板中，观察颜色变化，直至与碘不呈色时，在向各管加KI-I2试剂2滴，摇匀后观察。根据实验结果找出唾液淀粉酶的最适pH。（四）激活剂和抑制剂对酶活力的影响1、原理酶的活性常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为酶的激活剂；有些物质能使酶的活性降低，称为酶的抑制剂。如氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜离子为其抑制剂。2、操作12341%淀粉ml1.01.01.01.01%硫酸铜ml1.0——————1%氯化钠ml——1.0———

7、—1%硫酸钠ml————1.0——蒸馏水ml——————1.0混匀，37℃2min稀释的唾液ml0.50.50.50.5加酶后，迅速混匀，置37℃水浴保温，每隔30s分别取2滴反应液在白瓷板中，滴加1滴碘液，观察颜色变化，哪支试管液体最先不呈蓝色，哪管次之，说明原因。问题：为什么本次实验中会选用硫酸钠溶液？