实验四 酶的特性实验

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1、说明：本实验由四个小实验组成，其中第一个实验（酶的专一性）必做，其他三个小实验选做（至少做一个）写实验报告时，可以只写需要做的实验内容！实验四酶的特性实验一、实验目的酶是生物催化剂，生物体内化学反应基本上都是在酶的催化下进行的。通过本实验了解酶催化的特异性、温度对酶活力的影响、PH对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。二、实验内容本实验由酶的专一性实验、温度对酶活力的影响、PH对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响4个小实验组成。（一）酶的专一性1、实验原

2、理本实验以唾液淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用为例，来说明酶的专一性。淀粉和蔗糖无还原性，唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性二糖的麦芽糖，但不能催化蔗糖的水解。用班氏试剂检查糖的还原性。班氏试剂为碱性硫酸铜，能氧化具还原性的糖，生成砖红色沉淀氧化亚铜。2、材料、仪器与试剂(1)材料：新鲜配制的唾液及其稀释液(2)仪器：恒温水浴；沸水浴；试管及试管架；(3)试剂：2%蔗糖溶液；溶于0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液；班氏试剂。3、实验操作（1）稀释唾液的制备①唾液的获取用一次性杯取一定量的饮用水，漱口以清洁口腔，然后在嘴中含10-20m

3、l饮用水，轻漱2min左右时间，即可获得唾液的原液，内含唾液淀粉酶。②不同稀释度唾液的制备（用大试管）本实验需制备1：1、1：5、1：20、1：50、1：200等五个不同浓度的稀释唾液。举例说明：1:5指的是稀释了5倍的唾液，制备方法为1份原液+4份蒸馏水。1：20指的是稀释了20倍的唾液，制备方法为1份1：5的稀释液+3分蒸馏水。（2）唾液淀粉酶最佳稀释度的确定（严格按表1添加顺序做实验，用小试管做实验）表1唾液淀粉酶稀释度的确定管号1（1：1）2（1：5）3（1：20）4（1：50）5（1：200）0.5%淀粉溶液（滴

4、）44444稀释唾液（ml）1111137℃恒温水浴中保温5分钟班氏试剂（ml）11111沸水浴2～3分钟实验结果（2）淀粉酶的专一性表2淀粉酶专一性实验管号1234560.5%淀粉溶液（滴）4－4－4－2%蔗糖溶液（滴）－4－4－4最佳稀释度唾液（ml）－－11――煮沸过的最佳稀释度唾液（ml）－－－－11蒸馏水（ml）11－－－－37℃恒温水浴中保温5分钟班氏试剂（ml）111111沸水浴2～3分钟实验结果（二）温度对酶活力的影响1、实验原理酶的催化作用受温度的影响。在最适温度下，酶的反应速度最高。淀粉和可溶性淀粉遇碘

5、呈蓝色，糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色，在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水的程度可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。2、材料、仪器与试剂（1）材料：新鲜配制的唾液及其稀释液（2）仪器：试管及试管架；恒温水浴；冰浴；沸水浴；（3）试剂：溶于0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液；KI－I2碘溶液；3、实验操作取4支干燥的试管，编号后按下表加入试剂：表3温度对酶活力影响实验加样顺序管号1230.5%淀粉溶液（ml）1.51.51.5最佳稀释度唾液（ml）11 煮沸过

6、的稀释唾液（ml）  1实验结果摇匀后，将1、3号试管放入37℃恒温水浴中，2号试管放入冰水中。10分钟后1、2、3管均取出（将2号内液体分两半），用KI－I2溶液来检验1、2、3号管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。记录并解释结果。将2号管剩下的一半溶液放入37℃水浴中继续保温10分钟后，再用KI－I2液实验，记录实验结果。（三）PH对酶活力的影响1、实验原理酶的活力受环境PH值的影响极为显著。不同酶的最适PH不同。本实验观察PH对唾液淀粉酶活性的影响。唾液淀粉酶的最适PH约为6.8。2、材料、仪器与试剂（1）材料：新配制的

7、溶于0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液（2）仪器：试管及试管架；吸管；滴管；恒温水浴（3）试剂：PH为5.0、5.8、6.8、8.0的缓冲溶液；KI－I2碘溶液；PH试纸3、实验操作表4PH对酶活性的影响实验PH55．86．88.0缓冲液（ml）33330.5%淀粉溶液（ml）1111向第一个试管加入稀释唾液后，置于37℃的恒温水浴；等待1min后向第二个试管加入稀释唾液，置于37℃的恒温水浴；依次类推！最佳稀释度的唾液（ml）1111检查淀粉水解程度待向第四只试管加入唾液2min后，每隔1分钟从第3管中取出1滴反应液于白

8、瓷板上，加碘液检查反应进行情况，直至反应液变为淡棕黄色（颜色有点淡即可）。即可从第一只试管依次添加碘液，时间间隔也为1min。碘液(滴)1～２1～２1～２1～2现象为了更好的理解表格内容，下面对实验过程进行说明：各取缓冲液3ml，分别注入4支带有号码的试管，随后于各个试管中添加0.5%淀粉溶液1ml和最