生化大实验生技实验2.ppt

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1、实验二、微生物的分离培养一、目的要求1.掌握细菌的纯种分离技术2.掌握不同培养基的细菌纯种接种技术3.了解微生物分离纯化的原理二、实验内容及原理（一）接种工具1、接种环:用于细菌和酵母菌的接种接种针：用于半固体培养基穿刺接种镍铬丝2、刻度吸管：主要用于接种液体培养物10ml移液管1ml移液管毛细吸管实验室中常用的吸管3、玻璃涂布棒：主要用于分离或微生物计数时的平板涂抹。接种工具在使用前后都应该进行灭菌！（二）微生物的分离纯种技术1、平板划线分离法2、稀释涂布法A分区划线法B平行划线法（连续划线法）3、倾注平板法平板划线分离法通过划线，将混杂的细菌在平板表面逐一分散，经

2、培养后，各自形成菌落(colony)。根据菌落形态、特征挑选单个菌落，移种培养后，即得到纯种细菌，从而达到分离纯化的目的常用的划线方法有两种：分区划线法和平行划线法（连续划线法）1、分区划线法用途：主要用于杂菌较多的标本。菌种：混合菌悬液方法：用接种环以无菌操作挑取菌种，先在平板培养基的一边作第一次平行划线3～4条，再转动培养皿约70度，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再用同样的方法通过第二次划线部分作第三次划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线。划线完毕后，盖上培养皿盖，37℃倒置培养。1234实验结果培养后2、平行划线法（

3、连续划线法）用途：主要用于杂菌不多的标本菌种：混合菌悬液方法：接种环取菌种后在平板培养基上从涂有细菌处开始做连续平行划线，划线完毕后，盖上培养皿盖，37℃倒置培养。培养后实验结果（三）纯种接种培养1、斜面接种2、平板密集划线3、液体接种4、半固体穿刺接种1、斜面接种用途：保存菌种分类：点种、中央划线、稀波状蜿蜒划线、密波状蜿蜒划线、分段划线、纵向划线、挖块接种等。菌种：大肠杆菌、表皮葡萄球菌方法：用接种环挑取少量菌苔，移入斜面培养基管中，自斜面底部表面向上划一直线，再自底部自下而上蜿蜒划线，取出接种环灭菌后放回，培养基管口烧灼后盖回盖子。做好标记，放到试管架上，37℃

4、培养24h后，观察结果。2、平板密集划线用途：增菌菌种：大肠杆菌、表皮葡萄球菌方法：用接种环无菌操作取菌种，先在平皿中心划一“十”字，然后平行密集划线划满平板后转60度，重复平行密集划线，转60°，再重复平行密集划线。做好标记，37℃倒置培养24h，观察结果。3、液体接种用途：增菌菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌方法：用接种环挑取少量菌苔，移入液体培养基中，将带菌种的接种环在接近液面的器壁上轻轻摩擦使菌苔分散，取出接种环灭菌后放回，培养基管口烧灼后盖回盖子，轻轻摇动使菌种均匀分散在液体培养基中。做好标记，37℃培养24h，观察结果。1、固体培养物接种到液体2、液体培养物接

5、种到液体培养：直接用移液管吸取即可或用接种环取几环菌。4、半固体穿刺接种用途：用来观察细菌的运动性，作为鉴定细菌的特性之一菌种：表皮葡萄球菌、甲型副伤寒杆菌方法：用接种针挑取少量菌苔，移入半固体培养基管中，垂直刺入半固体琼脂培养基的中心，可刺到接近管底处，但不到管底，然后接种针循原路退出，接种针灭菌后放回，培养基管口烧灼后盖回盖子。做好标记，置试管架上，37℃培养24h，观察结果。用接种针接种，要求原路返回！1.菌种：混合菌悬液，大肠杆菌、表葡、枯草芽孢杆菌、甲型副伤寒杆菌2.培养基：固体平板、液体培养基、斜面、半固体。3.其它：接种环、接种针、酒精灯、无菌平板等三、

6、实验器材1.倒平板：溶化培养基冷却至50℃左右，倒平板，待凝固后备用。2、分区划线接种：（1人1块）菌种：混合菌悬液3、平行划线接种：（1人1块）菌种：混合菌悬液四、本次实验内容4、密集划线接种：（1人1块）菌种：大肠杆菌、表皮葡萄球菌5、斜面接种：（1人1块）菌种：大肠杆菌、表皮葡萄球菌6、液体接种：（1人1块）菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌7、半固体穿刺接种：（1人1块）菌种：表皮葡萄球菌、甲型副伤寒杆菌五、实验结果与讨论1.固体培养基上菌落的观察并绘图记录2.液体培养基中细菌生长的观察并绘图记录浑浊生长；菌膜生长；沉淀生长3.半固体培养基中细菌的观察细菌的生长现象

7、4.斜面培养基中细菌的观察并绘图记录细菌的生长现象培养基组成生长现象主要用途液体培养基0.3%牛肉膏1%蛋白胨0.5%NaCl均匀混浊沉淀生长表面生长(菌膜)增菌固体培养基液体培养基＋1.8%琼脂菌落(colony)菌苔(mossy)分离培养纯培养，增菌半固体培养基液体培养基＋0.5%琼脂沿穿刺线生长穿刺线模糊观察动力保存菌种思考题什么叫无菌操作？为什么要把培养皿倒置培养？接种前和接种后为什么要灼烧接种环？为什么要接种环冷却后才能用其与菌种接触？是否可以将接种环放在台子上待其冷却？你怎样才能知道它是否已经冷却？在液体培养基中有哪些生长现象？举例说明