生技实验指导

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1、实验一培养基母液的配制一、实验目的与意义学习大量元素、微量元素、铁盐、有机物类、激素类母液的配制方法。在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物类、激索类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。当配制培养基吋，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。二、实验用具和药品屯子天平(感量为l/1000g、l/10000g)、烧杯(500mL、lOOmL)、容量瓶(100niL>500mL、lOOOmL)、药匙、称量纸、小玻璃棒、电磁炉。配制各种母液所需药詁、1MHC1、95%乙醇。实验步龙(-)大量元素母液的配制(10X)按照培养基配方的用量，把

2、各种化合物的用量扩大10倍，用l/1000g感量的天平分别称取，用蒸饴水将CaCl2除外的其它化合物溶解后倒入1000mL容量瓶中，最后向容量瓶中缓缓加入溶解的CaCl2,以免形成沉淀。用蒸憎水定容到lOOOmLo表1MS培养基人最元素母液制备序号化合物名称培养基浓度(mg/L)扩大10倍用量(mg)1nh4no31650165002KNO3190019000定容至3KH2PO417017001000ml4MgSO4-7H2O37037005CaCl2-2H2O4404400(-)微量元素母液的配制(100X)配成两种母液：母液I、母液II。母液I的配制:用l/10000g的

3、电子天平分别称取CuSO4-5H2O和CoC12-6H2O各50mg,用蒸憎水溶解后倒入lOOmL容量瓶屮定容。母液II（微量元索母液）的配制：将其余微量元索化合物按照培养基配方用量的100倍，用l/10000g的电子天平分别称取，用蒸憎水溶解，待全部溶解后倒入容量瓶屮，用移液管吸取5mL母液I加入容量瓶屮，最后用蒸憎水定容到lOOOmLo表2MS培养棊微量元素母液I的配制序号化合物名称培养基浓度（mg/L）扩大2000借用量（mg）ICuSO4-5H2O0.02550定容至lOOmL2CoC12-6H2O0.02550表3MS培养基微量元索母液的配制序号化合物名称培养基浓度

4、（mg/L）扩大100倍用f：（mg）1KI0.83832Na2MoO4-2H2O0.25253MnSO4-4H2O22.322304ZnSO4-7H2O&6860泄容至lOOOmL5H3BO36.26206CuSO4-5H^O母液I取5mL7CoC12-6H2O（三）铁盐母液的配制（100X）目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。配制方法是：按培养基配方用量的100倍，用l/100g的天平称取FeSO4.7H2O和Na2-EDTA,分别用蒸饰水溶解，在沸水浴中将两种溶液混合，冷却后定容到lOOOmLo农4MS培养棊铁盐母液的配制序号化合物名称培

5、养基浓度（mg/L）扩大100倍用量（mg）1Na2-EDTA37.33730定容至1000mL2FeSO4-7H2O27.852785（四）有机物母液的配制（100X）激素母液的配制（lmg/10mL）激素在培养基中的用量较少，为了使用方便和准确，也应配成母液备用。按照培养基配方用量的100倍，用l/10000g的电子天平分别称取。用蒸馆水溶解，待全部溶解后倒入容量瓶中，用蒸懾水定容到lOOOmLo序号化合物名称培养基浓度（mg/L）扩大100倍用fi（mg）1甘氨酸22002盐酸硫胺素（VbJ0.440定容至3盐酸毗哆索（Vb6）0.550lOOOmL4烟酸0.5505肌

6、醇10010000表5MS培养基有机物母液的制备（五）激素一般不易溶于水，所以要借助助溶剂，不同激素用的助溶剂不同:1.配制生长素类，例如IAA、NAA、2.4-D、IBA,应先用少量95%乙醇充分溶解，或者用lmol/L的NaOH溶解，然后用蒸惚水定容到一定的浓度。2.细胞分裂素，例如KT,6-BA应先用少量lmol/L的盐酸溶解，再用蒸饰水定容。3.配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。注意：所有的母液都应保存在0〜4°C冰箱屮，若母液出现沉淀或霉团则不能继续使用。四、作业1.第一组同学配制大量元素（10X）和6-BA母液；第二组同学配制微量元素（100X）和2,4-D母液

7、;第三组同学配制有机物（100X）和NAA母液；第四组同学配制铁盐（100X）和KT母液。2.完成实验报告。元索化合物用量nh4no31650kno31900大量KH2PO4170MgSO4.7H2O370CaCl2.2H2O440KI0.83NaMoO4.2H2O0.25CuSO4.5H2O0.025微量COC12.6H2O0.025MnSO4.4H2O22.3ZnSO4.7H2O8.6H3BO36.2甘氨酸2Vbi（盐酸硫胺素）0.4有机VB6（盐酸毗哆醇）0.5烟酸0.5肌醇100FcSO4.7H