食品中空肠弯曲菌检测---江苏出入境.ppt

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1、粪便中空肠弯曲菌检测孙燕萍一、空肠弯曲菌的分类和特性：属于弯曲菌属。主要包括空肠弯曲菌（Campylobacterjejuni）、结肠(或大肠）弯曲菌（Campylobactercoli）、海鸥弯曲菌（Campylobacterlari）、乌普色拉弯曲菌（Campylobacterupsalensis）、胎儿弯曲菌（Campylobacterfetus）等11种。其中空肠弯曲菌（C.jejuni）对食品安全的威胁最为严重。空肠弯曲菌（Campylobacterjejuni）是从20世纪80年代起受到国内外广泛重视的人畜共患病菌。致病性：人类：急性

2、细菌性肠炎、格林-巴利综合征（GBS）、食物中毒。动物：雏鸡腹泻与肝炎；火鸡的肝炎与蓝冠病。犊牛的腹泻；绵羊的腹泻或流产。空肠弯曲菌的生物学特性革兰氏染色阴性。呈弧形，S形或螺旋形；菌体两端尖，有极鞭毛，能做快速直线或螺旋体状运动；1.5～5μm×0.2～0.5μm，无荚膜。微需氧环境：5%O2、10%CO2和85%N2。最适生长温度：42-43℃，37℃可生长，30℃以下不生长。空肠弯曲杆菌的流行病学和临床表现宿主：家禽、野生鸟类为最主要的传染源。(Rosef等在1981年调查了129个野生鸟类，结果表明24.8%携带空肠弯曲菌)鸟类迁移会造成

3、病原菌对湖水与河水的污染。细菌分布范围*该菌分布广泛，已从多种动物中分离出；也发现于食物与饮水中，尤其是畜禽肉及脏器与鲜奶。*食用动物中鸡的带菌率为首位，其次为猪。主要分布在活鸡的消化系统中如腺胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、直肠、泄殖腔等。*该菌在人或动物的粪便中存活约4周；在被污染的水源中可存活约5周。感染途径：*传播途径主要是由于摄取了该菌污染的食物与饮水后，细菌在人肠道内大量生长繁殖，引起急性肠炎。*被污染的禽肉与未经过巴氏消毒的牛奶是导致发病的主要原因.患者临床表现：患者表现为发热、腹泻、呕吐或肌肉痛。潜伏期平均3-5天，病程约7-10

4、天，粪便的特征是有时带血，镜检中有多形核白血球，重症病例也有痢疾样血、粘液粪便。根据美国疾病控制与预防中心（USA-CDC）多年的美国食源性病原微生物引起发病人数的统计资料，空肠弯曲菌导致的病例数排名第二。禽肉、生牛奶中的空肠弯曲菌被美国列为重点监测食源性致病菌之一。32ndCCFH（1999年）提出5组优先评估的“病原-食品”组合,其中包括“禽肉-空肠弯曲菌”。空肠弯曲菌在许多发达国家也是被报告最普遍的胃肠炎致病菌之一，如：美国、英国、丹麦、芬兰、爱尔兰、荷兰、挪威、瑞典、瑞士等。NCTC11168基因组图谱基因组相对小，大小在1.6-1.7M

5、bp.DNA中富含A/T,G/C比率在29-47mol%.由于基因组体积小，对培养要求就比较苛刻。NCTC11168共有碱基对1.641.481个，含有1654个基因组。A/T的含量在69%。二、粪便中空肠弯曲菌的检验技术2012年试行江苏省感染性腹泻综合监测工作方案空肠弯曲菌空肠弯曲菌：在微需氧条件下42℃生长而25℃不能生长，在选择性固体培养基上形成特征性菌落，按照本标准检验时具有相符合的运动特性、生长特性与生化特性的革兰氏阴性菌。设备和材料微需氧培养装置:能够提供微需氧条件（5%O2、10%CO2和85%N2)如使用产气剂的厌氧罐/袋或其它

6、可代用的装置等。三气培养箱（如Binder等)弯曲菌检验程序增菌液接种方法一：稀释处理将24h和48h的增菌液原液分别划线接种mCCDA平板.（备注：也可选用CFA显色平板或SimPlate分离鉴定及定量培养基）优点：经济、方便缺点：可能会有杂菌干扰mCCDA平板上所挑取的可疑菌落通常带有金属光泽、扁平、湿润、沿划线生长。CFA显色平板上所挑取的可疑菌落为红色、突起、湿润，菌落较小直径约2～3mm，边缘有一圈红色的透明环，中间有一个圆形的不透明、颜色较深的红色小点的菌落。将所挑取的3～5个可疑菌接种到不含抗生素的哥伦比亚血琼脂平板，微需氧条件下4

7、2±0.5℃培养24h-48h后，进行后续的空肠弯曲菌鉴定。空肠弯曲菌的鉴定快速鉴定1.形态与动力性检测*对挑取菌落进行革兰氏染色镜检，空肠弯曲菌为革兰氏阴性，弯曲如小逗点状，两菌体的末端相接时，呈S形、海鸥展翅状或螺旋状。*对挑取可疑菌落制作湿片，镜检可见本菌呈螺旋样运动。快速鉴定2.氧化酶试验使用铂/铱接种环或玻璃棒，挑取单个菌落的一部分，然后接种到用氧化酶试剂润湿的滤纸上，如果在10秒内出现紫红色、紫罗兰或深蓝色为阳性，弯曲菌则为阳性。快速鉴定3.过氧化氢酶检测挑取一环菌落培养物，加到在干净显微镜玻片上的一滴3％过氧化氢溶液中，如果在30秒

8、内出现气泡则判定结果为阳性。快速鉴定4.马尿酸盐水解试验挑取欲检测的菌落培养物，加到盛有0.4mL1％的马尿酸钠的试管中制成菌悬液，注意