单向免疫扩散试验-10.ppt

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1、单向免疫扩散试验沉淀反应（precipetaiton）是可溶性抗原与相应抗体特异性结合所出现的反应。1905凝胶内沉淀试验1946试管免疫扩散技术1965单向免疫扩散技术1967散射比浊法在琼脂胶中混入一定量抗体，使待测的抗原溶液从局部向琼脂内自由扩散，在抗原抗体比例合适区域内形成可见的沉淀环。(抗原抗体反应时，只有其中一种成分发生扩散）根据试验形式可分为试管法和平板法两种。测量沉淀环的直径或计算环的面积。沉淀环直径或面积的大小与抗原量相关，但不是直线相关，而是对数关系。同时，这种沉淀环与分子量和扩散时间有关。试剂与器材1.羊抗人IgG诊断血清2.人IgG标准液（30g/L）3.待测人

2、血清4.琼脂粉5.生理盐水6.载玻片(玻璃板）、三角烧瓶、吸管、加样器、打孔器、水浴箱、湿盒、直尺等操作方法1.制备琼脂凝胶（1）生理盐水配制琼脂凝胶（15g/L），煮沸溶化至澄清，置56℃水浴中备用。（2）取适量溶化琼脂，以琼脂∶抗体＝4∶1比例吸取相应抗体，与琼脂充分混合，置56℃水浴中备用。2.制板（1）取洁净干燥玻片，置于水平台上（2）用吸管吸取4ml琼脂（含抗体），于载玻片1/3处浇注，使琼脂凝胶均匀铺满玻片，不要留有气泡。3.打孔待琼脂凝固后，用直径3mm的打孔器打孔，孔距10～12mm4.加样用微量加样器吸取待检血清10μl,加入相应的试验孔中，做好标记。将人IgG标准液

3、（30g/L）用生理盐水分别做如下稀释：原倍，1:2，1:5，1:10，1:20，1:30，用微量加样器吸取稀释标准液10μl,加入相应的试验孔中，做好标记。5.扩散将加样的琼脂凝胶板平放于湿盒内，置37℃24h后观察结果。结果判断精确测量各试验孔沉淀环的直径，以沉淀环直径为横坐标，相应孔中IgG含量的对数为纵坐标，绘制标准曲线。(logC/d=K)注意事项1.玻片须干燥、洁净，边缘无破损。置水平处。2.浇制琼脂板时动作要匀速3.打孔时避免水平移动4.加样时避免气泡或加至孔外，加样要准确5.应同步绘制标准曲线6.抗血清与溶化琼脂混合时，温度应控制在56℃