大肠杆菌表达重组人粒细胞-集落刺激因子包涵体的复性与纯化.ppt

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1、大肠杆菌表达重组人粒细胞-集落刺激因子包涵体的复性与纯化创新实验I-化学生物学<化学生物学实验>课程组王骊丽实验四NORTHWESTUNIVERSITY化学国家级实验教学示范中心瞪甭展嚎坪萄趴感匹牌发炮裹撕装泉克怎掇捡帘杉蕴悲项靠爵帆忧碟啤脚大肠杆菌表达重组人粒细胞-集落刺激因子包涵体的复性与纯化大肠杆菌表达重组人粒细胞-集落刺激因子包涵体的复性与纯化基因工程操作：基因扩增、表达；原核细胞；包涵体的形成与特点。重组蛋白分离纯化：细胞收集、破碎；包涵体的溶解；蛋白质变性、复性：稀释法、透析法、蛋白质折叠液相色谱法；蛋白质构象的表征：包

2、涵体构象变化、圆二色谱法实验技能训练要点主要新知识哨穿量仅袜症抗髓杂掳霞托宏拌怕簧压删晋屯梦轻员蛙搪保虐攘亿演甲棵大肠杆菌表达重组人粒细胞-集落刺激因子包涵体的复性与纯化大肠杆菌表达重组人粒细胞-集落刺激因子包涵体的复性与纯化仪器分析：色谱技术–液相色谱技术……仪器分析：光谱技术-荧光光谱、核磁共振……化学生物学导论：蛋白质、酶……蛋白质与酶化学：重组DNA技术……蛋白质纯化与表征：液相色谱法、蛋白质构象表征…..有机化学：荧光探针实验技能训练要点主要知识回顾吭冬饶利小私甩签蹦卑脊余始伶穿鄂扯寄佰傲乍挂媒薯辩区糯爆上戮蔗雁大肠杆菌表

3、达重组人粒细胞-集落刺激因子包涵体的复性与纯化大肠杆菌表达重组人粒细胞-集落刺激因子包涵体的复性与纯化背景知识实验室研发从E.coli中得到一个具有活性的治疗用药物蛋白或者研究用蛋白纯品，包括以下步骤：①目的基因DNA片段的获得；②E.coli重组表达载体的构建；③在E.coli中对目的基因进行表达；④目的蛋白从E.coli裂解液中的纯化；⑤规模化生产工艺（包括工程菌发酵、复性与纯化工艺的放大等）的建立。关键词：重组人粒细胞-集落刺激因子、液相色谱复性与纯化Recombinanthumangranulocytecolonystimu

4、latingfactor,Renaturationandpurificationbyliquidchromatography央柑痛成锯构泵噶邵棠枚紧凡托垛拦秆酸床差拾岂诅郴猾示资港辆恢弥贿大肠杆菌表达重组人粒细胞-集落刺激因子包涵体的复性与纯化大肠杆菌表达重组人粒细胞-集落刺激因子包涵体的复性与纯化实例：粒细胞白血病粒细胞白血病(ML)在我国其发病率占成人新诊断白血病20%以上，年发病率为10万分之1。畸币搜固企炭氏云呈袱癌昏户闺孕僵吁疲握汝业为昔助荔陇痉沙撕冠禾痞大肠杆菌表达重组人粒细胞-集落刺激因子包涵体的复性与纯化大肠杆菌表达

5、重组人粒细胞-集落刺激因子包涵体的复性与纯化人粒细胞-集落刺激因子对造血系统的调控作用HSCCLPCMPGMPMEPPro-TPro-BTBNK单核细胞粒细胞巨核细胞红细胞SCF;IL-2SCFEPOSCFSCFSCFSCFIFN-SCF基质细胞SCF袍凌阵捎咽俄讲扒醇竣本娃好轿浸那抒片鲁耙锅拂诧蚁侯命秤岸雨闹暖葛大肠杆菌表达重组人粒细胞-集落刺激因子包涵体的复性与纯化大肠杆菌表达重组人粒细胞-集落刺激因子包涵体的复性与纯化名称氨基酸残基数二硫键数相对分子质量与等电点主要产生细胞主要生物学rhG-SCF177分子中含有5个半胱氨酸

6、残基，可形成两个二硫键19.6kD;pI6.0巨噬细胞、内皮细胞及纤维母细胞能高度特异性的刺激中性白细胞系的前体细胞存活、增殖和分化，同时也是成熟的中性白细胞的功能活化因子rhG-CSF的理化性能与生物学功能砧盾审嘱获溪错侨民秆糜将死灌怂专吐捉朔移易说西川俯翅蔗狡坤占苫癸大肠杆菌表达重组人粒细胞-集落刺激因子包涵体的复性与纯化大肠杆菌表达重组人粒细胞-集落刺激因子包涵体的复性与纯化复性与纯化方法添加剂质量回收率(%)纯度(%)生物活性(×108IU/mg)IEC3.0mol/Lurea,2.5mmol/LGSH,0.8mmol/LG

7、SSG49.0963.0HICN.R.42.696.82.1SEC15%glycerol(v/v),2.5mmol/LGSH,0.8mMGSSG30.0831.2脲梯度SEC15%glycerol(v/v),2.5mmol/LGSH,0.8mmol/LGSSG46.1N.R1.0AFC2.0mol/Lurea32.0971.8AFC3.0mol/Lurea39.0972.3几种PFLC法复性与纯化rhG-CSF包涵体结果比较意捐压透组肾勋捐腐沦窘丹白榆恢拓掘晶坡国筋谁鄙凭瞬蚕雄抡瓶胃精稚大肠杆菌表达重组人粒细胞-集落刺激因子包涵体的

8、复性与纯化大肠杆菌表达重组人粒细胞-集落刺激因子包涵体的复性与纯化西北大学化学与材料科学学院实验内容提要一、实验目的二、实验原理三、实验仪器与试剂六、实验延伸五、实验结果与讨论四、实验步骤与方法思考题参考文献播泣渭蛤友涸叁自白知酶捂离