食品中桔青霉素的测定 标准文本.doc

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1、GB/Txxxx—xxxx食品安全国家标准食品中桔青霉素的测定（征求意见稿）xxxx—xxxx实施xxxx—xxxx发布中华人民共和国卫生部发布1.1.1.1　2010-06-01实施2010-××-××发布GB/Txxxx—xxxx前言本标准代替GB/T5009.222-2008《红曲类产品中桔青霉素的测定》、SN/T2426-2010《进出口粮谷中桔青霉素含量检测方法液相色谱法》和SN/T2916-2011《出口食品中桔青霉素的测定方法免疫亲和柱净化-高效液相色谱法》。整合后的标准与以上标准相比，主要变化如下：——标准名称修改

2、为“食品安全国家标准食品中桔青霉素的测定”；——增加了净化步骤，即为第一法中的免疫亲和柱净化及第二法中的C18固相萃取柱净化高效液相色谱法；——加了适用范围。从红曲类产品扩展到大米、玉米、辣椒、大麦、小麦、燕麦及红曲类产品。——对标准文本的格式进行了重新编排和调整。1GB/Txxxx—xxxx食品安全国家标准食品中桔青霉素的测定1　范围本标准规定了食品中桔青霉素的测定方法。本标准第一法适用于大米、玉米、辣椒、红曲制品中桔青霉素的测定，第二法适用于大米、大麦、燕麦、小麦中桔青霉素的测定。第一法免疫亲和柱净化-高效液相色谱法2　原理及

3、依据试样中的桔青霉素用甲醇-水提取，提取液经过滤、稀释后，用免疫亲和柱净化，采用液相色谱结合荧光检测器测定桔青霉素的含量，外标法定量。3　试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，实验用水为GB/T6682规定的二级水。3.1试剂3.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。3.1.2乙腈（CH3CN）：色谱纯。3.1.3三氟乙酸（C2HF3O2）：色谱纯3.1.4冰乙酸（C2H4O2）：色谱纯。3.1.5氢氧化钠（NaOH）：分析纯。3.2试剂配制3.2.1氢氧化钠溶液（2mol/L）：称取80.0g固体氢氧化钠，溶于1L水中。

4、3.2.2三氟乙酸水溶液：1L超纯水中加入0.5mL三氟乙酸，氢氧化钠溶液调节pH2.5。3.2.3稀释液：用氢氧化钠溶液将三氟乙酸水溶液的pH调节至7.5。3.2.4洗脱液：甲醇-三氟乙酸水溶液（70:30，体积比）。3.3标准品1GB/Txxxx—xxxx桔青霉素（Citrinin）标准品：1mg，纯度≥99.0%。3.4标准溶液配制3.4.1标准储备液：准确称取一定量的桔青霉素粉末以甲醇溶解并定容至10.0mL作为标准储备液，浓度为100μg/mL，于4℃下保存。3.4.2标准中间储备液：准确移取1.0mL上述桔青霉素标准储

5、备液于10mL容量瓶中，用甲醇定容，浓度为10μg/mL，于4℃下保存。3.4.3标准工作液：用上述标准中间储备液，根据需要配置成适当浓度的标准工作液。3.5材料3.5.1桔青霉素免疫亲和柱：CitriTestTMHPLC柱（非商业性声明），或者相当。3.5.2玻璃纤维滤纸。1　仪器和设备4.1分析天平：感量0.001g。4.2高速均质器：12000r/min。4.3高效液相色谱仪配荧光检测器。4.4混匀器。4.5纯水系统。5分析步骤5.1提取称取粉碎样品10.0g（精确至0.1g）于250mL具塞锥形瓶中，加入50mL甲醇-水（

6、70+30，体积比）提取液，以均质器高速搅拌提取2min，过滤，得滤液。移取1.0mL上步的滤液，置于另一干净的容器中，加入49mL稀释液（3.2.3）稀释、混匀。以玻纤滤纸过滤几次，直至滤液澄清，随即进行免疫亲和柱净化。5.2免疫亲和柱净化将免疫亲和柱连接于10mL玻璃针筒下，准确移取10.0mL（相当于0.04g试样）上述澄清滤液过免疫亲和柱，以1滴/s~2滴/s的流速全部通过亲和柱；加入5mL稀释液（3.2.3）以1滴/s~2滴/s的流速淋洗柱子，直至空气进入到亲和柱中，弃去全部流出液；5.3洗脱1GB/Txxxx—xxxx

7、准确加入1.0mL洗脱液（3.2.4）进行洗脱，洗脱流速为1滴/s~2滴/s。收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。5.4仪器参考条件色谱柱：ZORBAXSB-C18，柱长：150mm，内径：4.6mm，粒度：5μm，或相当者；流动相：乙腈-三氟乙酸水溶液（60+40，体积比）；流速：1.0mL/min；检测条件：激发波长331nm，发射波长500nm；进样量：标准5μL、样品100μL。5.5标准曲线的制作移取适量的标准工作液，以甲醇稀释成5个不同浓度的标准工作液，以其保留时间进行定性，以化学工作站建立标准工作液中桔青霉素的响应

8、值与桔青霉素含量的线形方程，并对样液的色谱数据进行处理。在上述色谱条件下，桔青霉素的保留时间为3.18min左右。6分析结果的表述试样中桔青霉素含量按公式（1）计算：…………………………….（1）其中：—样品中桔青霉素的含量，单位为微克每千克（µg