红曲类产品中桔青霉素的测定

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1、GB/Txxxxxxxxxxxx食品安全国家标准红曲类产品中桔青霉素的测定（征求意见稿）xxxx-xx-xx实施xxxx-xx-xx发布中华人民共和国卫生部发布中华人民共和国卫生部发布1.1.1.1　2010-06-01实施2010-××-××发布GB/Txxxxxxxxxxxx前言本标准代替GB5009.222-2008。本标准与GB5009.222-2008相比，主要变化如下：——修改了标准的中文名称，标准中文名称改为《食品安全国家标准红区类产品中桔青霉素的测定（理化方法）》；——按照GB//T20001.4-2001对原标准的结构进行了修改。

2、7GB/Txxxxxxxxxxxx食品安全国家标准红曲类产品中桔青霉素的测定1　范围本标准规定了红曲类产品中桔青霉素的测定方法。本标准适用于红曲米、红曲红（固态、液态）、红曲发酵液和用红曲菌生产的保健食品中桔青霉素的测定。2　原理液态红曲类样品经乙醇提取、离心、过滤后经高效液相色谱仪（HPLC）分析；固态红曲类样品经甲苯-乙酸乙酯-甲酸提取、超声波萃取、离心、过滤后经HPLC分析，外标法定量。3　试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682中规定的一级水。3.1试剂3.1.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。3.1.2磷酸（

3、H3PO4）：色谱纯。3.1.3甲醇（CH3OH）：色谱纯。3.1.4甲苯（C6H5CH3）。3.1.5乙酸乙酯（C4H8O2）。3.1.6甲酸（CH2O2）。3.1.7无水乙醇（C2H5OH）：色谱纯。3.2试剂配制复合萃取剂（TEF）：甲苯–乙酸乙酯–甲酸（7+3+1），配制方法是将7份体积的甲苯（3.5）、3份体积乙酸乙酯（3.1.5）和1份体积酌甲酸（3.1.6）混合而成。3.3标准品桔青霉素（C13H14O5）标准品：纯度>99%。3.4标准溶液制备3.4.1桔青霉素标准贮备溶液（50mg/L）：准确称取桔青霉素标准品，用甲醇溶解并定容至

4、浓度为50mg/L，密封后4℃冰箱避光保存。3.4.2桔青霉素标准工作溶液（5mg/L）：用甲醇将10mL的50mg/L桔青霉素标准贮备溶液定容至100mL，密封后4℃冰箱避光保存，工作液现用现配。工作液从冰箱取出后应于室温下至少放置10min，涡旋混匀后方可使用。7GB/Txxxxxxxxxxxx3.4.3桔青霉素标准曲线工作液：将标准储备液用甲醇系列稀释后，配成浓度为0.1mg/L、0.25mg/L、1mg/L、5mg/L、10mg/L的标准曲线工作溶液。1　仪器和设备4.1高效液相色谱仪，配有荧光检测器。4.2超声波细胞破碎仪。4.3电子天平

5、（感量0.0001g）。4.4pH计（精度0.01）。4.5匀浆器。4.6离心机。4.7旋转蒸发仪。4.8微孔有机滤膜（孔径0.45µm）。4.9数显恒温水浴锅（温度精度土1℃）。4.10涡旋混匀器。4.11磁力搅拌器。2　分析步骤5.1试样制备5.1.1液态红曲样品将带有菌丝体的液态发酵红曲样品匀浆后用吸量管吸取10mL（液态红曲红样品直接取样10mL），置于50mL具塞试管中，加入20mL无水乙醇，60℃水浴加热1h（期间不断振摇），冷却至室温后转入塑料离心管中，3000r/min离心15min，上清液经0.45µm滤膜过滤后进行HPLC分析。

6、5.1.2固态红曲制品用电子天平（4.3）准确称取一定量固态红曲样品（色素用红曲米为2g，用红曲菌生产的保健食品为3g，酿酒用曲为3g）于50mL具塞比色管中，加入20mLTEF溶液（3.2），超声提取10min（强度40%，工作5s，间隔5s），3000r/min离心20min，上清液转入50mL具塞试管中，残渣用15mLTEF溶液（3.2）同上述步骤再提取两次，合并三次提取上清液于50mL具塞比色管中，40℃真空浓缩（4.7）至干后加入30mL甲醇溶解，经微孔有机滤膜（4.8）过滤后进行HPLC分析。准确称取1g粉状红曲红或红曲黄色素祥品，在磁

7、力搅拌下缓缓加到盛有20mLTEF溶液（3.2）的烧杯中，继续搅拌30min后，3000r/min离心20min，以下按固态红曲样品同样的方法自“上清液转入50mL具塞试管中”起，依法操作。5.2分析步骤5.2.1液相色谱分析条件a）色谱柱：C18色谱柱（150mm×4.6mm，粒度5µm）；b）柱温：28℃；c）流动相：乙腈（3.2）+水=35+65，水用色谱纯磷酸（4.3）调pH至2.5；d）流速：1.0mL/min；e）检测器：荧光检测器，激发波长331nm，发射波长500nm；f）进样量：20µL。5.2.2色谱分析7GB/Txxxxxxx

8、xxxxx分别将20pL不同质量浓度（0.1mg/L、0.25mg/L、1mg/L、5mg/L、10mg/L）的桔青霉素标