蚕用消毒剂药效评价试验技术指导原则.doc

《蚕用消毒剂药效评价试验技术指导原则.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、蚕用消毒剂药效评价试验技术指导原则一、概述（一）定义与目的蚕用消毒剂药效评价试验技术指导原则是为蚕用消毒剂进行临床试验制定的。蚕用消毒剂临床消毒效果评价以家蚕为主要对象，其目的是为了评价一种蚕用消毒剂是否对家蚕病原微生物具有消毒（杀灭）作用，并确定临床应用的推荐用法与用量。广谱蚕用消毒剂必须对本指导原则中列出的所有菌、毒种进行消毒试验，专用消毒剂可选择1种或几种菌、毒种进行试验。（二）适用范围本指导原则适用于蚕室蚕具消毒剂、蚕用烟熏剂和桑叶叶面消毒剂对各种病原体的消毒效果评价。二、试验设计（一）试验用蚕1.品种：用一化性或二化性的现行普通四眠蚕品种，所用蚕

2、种为杂交种。2.来源：有生产许可证单位生产的合格蚕种。（二）试验材料1.受试药物及来源：受试药物应与拟上市的制剂完全一致，有完整的产品质量标准，有合乎规定格式的说明书。受试药物应来源于同一批号，由申报单位自行研制并在GMP验收合格的车间生产的样品，并提供中国兽医药品监察所或农业部认定的其他兽药检验机构出具的产品检验合格报告。2.标准培养基：下列标准培养基和稀释液用于试验菌、毒种的制备。营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、稀释液（胰蛋白胨生理盐水溶液）、沙堡液体培养基、沙堡琼脂培养基、有机干扰物（3%牛血清白蛋白）。上述培养基配方参见附录A。3.试验菌、毒种应采

3、用大学或省级以上专业研究机构鉴定保藏的菌种。如果采用自然感染病例分离的菌株，应详细记录其来源，并应经有资质的部门鉴定方可用于试验。试验菌、毒种的制备、计数、保藏及试验菌片的制备等见附录B。（三）残留消毒剂的去除和中和剂选择观察药物的杀菌（消毒）作用时，必须在药物与菌体接触一定时间后立即去除菌体周围的药物或消除药物的杀菌作用。去除残留消毒剂的方法可用化学中和法和离心沉淀法等。1.化学中和法是目前最常用的一种方法。做法是向标本回收液中加入适当量的中和剂，使消毒剂浓度得到稀释，并且消毒作用受到化学中和。中和剂选择试验方法见附录C。2.离心沉淀法将消毒处理后的标本

4、用磷酸盐缓冲液反复离心洗涤3次，最后将沉淀物转种到合适培养基上进行培养。无论用何种方法，事先必须用实验证明该法可中止消毒剂的作用且对实验菌、毒种无抑制作用，对培养基无不良影响。（四）试验分组进行蚕用消毒剂试验时应分以下各组。1.空白对照（不感染不处理）组。2.感染不处理组（阴性对照组）：根据各种试验的规定，用稀释液代替消毒剂溶液，按试验组同样的方法进行试验。所得结果代表菌液原有浓度，以其作为计算杀灭对数或灭活率的初始浓度。3.试验组：根据本原则中所列试验菌、毒种，选定所有的试验菌种和不同消毒剂浓度以及作用时间进行试验；如试验目的是研制专用的蚕用消毒剂，根据

5、本原则中所列试验菌、毒种，选定相应的试验菌、毒种和不同消毒剂浓度以及作用时间进行试验。4.药物对照组（阳性对照组）。每个组设3个重复，每个重复（单元）用50条2龄起蚕。（五）试验方法蚕用消毒剂进行消毒试验时，常用的试验方法有：悬液定量杀灭试验、载体浸泡定量杀灭试验、载体喷雾定量杀灭试验和烟熏定量杀灭试验等。进行蚕室蚕具消毒剂研制时，一般采用悬液定量杀灭试验或载体浸泡定量杀灭试验；或追加载体喷雾定量杀灭试验；进行烟熏剂研制时，采用烟熏定量杀灭试验。1.细菌芽孢消毒试验进行细菌芽孢消毒试验时，有下列4种方法可供选择，按测试目的选择1种方法进行试验。（1）悬液定

6、量杀灭试验操作程序消毒液配制：首先按试验设计或产品说明书要求配制消毒液。无特殊说明者，一律使用无菌硬水配制，配制的浓度为待测浓度的1.25倍（例如要评价的消毒液浓度为200mg/L，则应配制250mg/L），置20℃±1℃水浴备用。试验菌液配制：按照“附录B试验菌、毒种的制备、计数、保藏及试验菌片的制备”规定的方法配制实验用菌悬液，浓度为1×108cfu/ml～5×108cfu/ml。消毒处理：取消毒试验用无菌大试管，先加入0.5ml试验用菌悬液，再加入0.5ml有机干扰物，混匀，置20℃±1℃水浴中5min后，用无菌吸管吸取上述浓度消毒液4.0ml注入其

7、中，迅速混匀并立即记时。中和：待试验菌与消毒剂相互作用至各预定时间，分别吸取0.5ml试验菌与消毒剂混合液加于4.5ml经灭菌的中和剂中，混匀。活菌计数：各管试验菌与消毒剂混合液经加中和剂作用10min后，分别吸取1.0ml样液，按活菌培养计数方法测定存活菌数，每管样液作两次活菌计数即可。如平板上生长的菌落数较多时，可进行系列10倍稀释后，再进行活菌培养计数。对照：同时用稀释液代替消毒液，进行平行试验，作为感染不处理组（阴性对照组）。以不作任何处理的作为空白对照组。培养与观察：所有试验样本均在37℃温箱中培养，培养72h观察最终结果。重复与计量：试验重复3

8、次，计算各组的活菌浓度（cfu/ml），并换算为对数值（N），然后