微生物的利用知识点归纳补充

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1、万家启航教育2018春季班高二生物82828756微生物的利用知识点归纳补充一．微生物的实验培养1.培养基：①概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。②成分：一般都含有碳源、氮源、水和无机盐，还需要满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。③类型：物理性质划分：固体（含琼脂等凝固剂）-用于微生物的分离，鉴定，计数，菌种保存液体：扩大培养，工业生产等半固体：观察细菌的运动，厌氧菌的分离等按用途划分：基础培养基：是含有一般微生物生长繁殖所需基本营养物质的培养

2、基。牛肉膏蛋白胨培养基（LB)是最常用的基础培养基.选择培养基：是在普通培养基中加入特殊营养物质或化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。用于将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来。鉴别培养基：是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物※注意：有些营养物质既可做为C源，也可以作为N源，如牛肉膏，蛋白胨等；异养型微生物需要有机C源或N源，有机C源或N源可作为其能源；可以通过改变培养基的成分来筛选除某些特定的微生物。2.无菌技术①

3、②．消毒和灭菌的区别项目条件结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法5万家启航教育2018春季班高二生物82828756灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌③．几种消毒和灭菌方法及其适用范围类型适用范围操作方法消毒方法煮沸消毒法日常生活100℃煮沸5～6min巴氏消毒法不耐高温的液体70～75℃煮30min或80℃煮15min化学药剂

4、生物活体、水源等擦拭等，如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源紫外线房间、仪器设备紫外线照射30min灭菌方法灼烧接种工具、接种时用的试管口或瓶口等直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧干热灭菌耐高温、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属用具等物品放入干热灭菌箱，160～170℃加热1～2h高压蒸汽灭菌培养基、培养皿等，生产和实验室常用高压蒸汽灭菌锅内，(1Kg/cm2)100kPa，121℃，15～30min1.培养基的配制：牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。※配制牛肉膏蛋白胨固

5、体培养基的注意事项①倒平板的适宜温度是60℃左右，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。②平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。③调PH应在灭菌之前④试管斜面制备：直接将未凝固的含琼脂的培养基加入试管，灭菌后讲试管斜放，令其冷却，即成斜面尿素固体培养基的制备;※注意：培养基：(500g/cm2)90℃以上，30min灭菌；尿素溶液：G6玻璃漏斗过滤灭菌3.细菌的分离方法：划线分离法和涂布分离法(1)划线分离法①方法：用接种环蘸菌液后在含有固体培养

6、基的培养皿平板上划线，使聚集的菌种分散到培养基的表面。每个菌落就是一个细菌产生的后代。②应用：用于基因工程的大肠杆菌的工程菌，可以用划线分离法获得产物表达能力高的菌株。由于工程菌的质粒中通常有抗性基因(如抗氨苄青霉素基因)，如在培养基中加入一定量的氨苄青霉素，由于非工程菌和其他杂菌都没有抗性基因，所以在划线后只有存在抗性基因的工程菌能生存下来。5万家启航教育2018春季班高二生物82828756(2)涂布分离法：先将培养的菌液稀释，通常稀释到10－7～10－5倍，然后取0.1mL稀释度不同的菌液加

7、在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进行培养，在适当的稀释度下，可产生相互分开的菌落。（3）细菌的两种分离方法的比较项目划线分离法涂布分离法工具接种环玻璃刮刀原理通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细菌细胞繁殖而来的肉眼可见的细胞群体，即菌落将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细菌细胞，从而

8、能在培养基表面形成单个的菌落特点方法简单，但不适宜计数单菌落更易分开，但操作复杂目的使培养基上形成单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落※划线分离操作的注意事项①第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环。②灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。③划线时最后一区域不要与第一区域相连。※涂布分离操作的注意事项4.微生物数量的统计方法常规的计数方法是涂布分离法和显微镜直接计数法。(1)涂布分离法该法的基本原理是：将待测含菌样品经适当稀释，使其中的微生物充分分散成单个