多维色谱分析在蛋白质检测中的应用.ppt

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1、多维色谱分析在蛋白质检测中的应用04081020王文博erasure目标蛋白质其它特征…等电点分子大小带电状况疏水性目标蛋白的特征相对分子质量erasure根据以上信息，首先进行第一维分离,然后将第一维馏分再进行第二维分离。为了得到最大的分离效率,必须注意以下两点:1.理想情况下,各维应具有完全不同的分离机制;2.高维的分离速度应快于低维的分离速度,以避免已分开的组分在高维分离中重新混合。erasureerasure形状图案形状：第一维图案：第二维Giddings理论多维色谱的总峰容量(P)等于每一维的峰容量(Pi)的乘积。P=P1×P2×P3·

2、·····erasure假如两种分离系统都有100的峰容量,那么良好的二维系统理论上可产生10000的峰容量。erasureGiddings指出峰容量的提高程度和样品组分分布的有序程度有着密切的关系。与一维分离模式相比,多维分离技术的最大特点是可极大地提高峰容量。样品维数(sampledimen-sionality)erasure只有当这两个维数相等时,才能充分发挥多维系统的分离能力。样品维数大于系统维数：→组分的峰分布是无序的,会限制分离的效果。样品维数小于系统维数：→尽管组分的峰分布是有序的,但多维系统的高峰容量的性能并没有得到发挥。eras

3、ure无法识别erasure?erasure√erasure1.多维高效液相色谱(HPLC)3.多维高效液相色谱-毛细管电泳(HPLC-CE)2.多维毛细管电泳(CE)常见的多维色谱分析法erasure多维高效液相色谱(HPLC)即是将分离机理不同而又相互独立的两支色谱柱串联起来构成的分离系统。样品经过第一维的色谱柱进入接口中,通过浓缩、捕集或切割后被切换进入第二维色谱柱及检测器中。在一维分离系统中不能完全分离的组分,可能在二维系统中得到更好的分离,分离能力、分辨率得到极大的提高。以二维液相色谱为例：erasure多维高效液相色谱技术在实际蛋白质

4、检测中又分为：整体蛋白质混合物的多维色谱分离技术。多肽混合物的分离技术。例erasure在研究白血病细胞系蛋白质组时待检测蛋白质混合物二维液相色谱分离--多维色谱预分离色谱聚焦根据不同蛋白质的等电点不同进行分离非多孔填料的反相柱收集馏分浓缩和酶解erasure基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI－TOF－MS)预处理后的馏分蛋白质鉴定系统数据库另外,色谱分离还可与其他分离手段相结合,用于蛋白质翻译后修饰的研究中。erasure离子交换色谱-反相液相色谱与质谱联用技术计算机检索(鉴定混合物中的蛋白质)。样品(细胞、组织等)Trypsin酶解

5、多肽混合物阳离子色谱柱(第一维色谱:强阳离子交换色谱分离,阶梯梯度洗脱)进样强阳离子交换色谱馏分进样RP-HPLC(第二维色谱:RP-HPLC分离,线性梯度洗脱)RP-HPLC分离馏分进样MS,MS/MS(多肽序列分析)erasure色谱聚焦-反相液相色谱与质谱联用技术。亲和色谱-反相液相色谱与质谱联用技术。erasure毛细管电泳的缓冲液通常是高离子强度、低挥发性,与质谱的兼容性较差;与LC-MS联用相比,CE-MS联用技术在生命科学领域的应用尚处于起步阶段,其关键问题在于CE与MS的接口尚不能满足需要。主要原因是:(2)二者的工作速度不匹配。

6、多维毛细管电泳(CE)erasure实际操作中二维液相色谱与质谱联用多维高效液相色谱装置图1999年Link等提出了一种新型的多维蛋白质识别技术谢谢观看！ColumnHPLC色谱柱MOS制作2005.12.27erasure