实验二 血涂片制备 白细胞分类计数.ppt

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1、实验二血涂片制备染色及白细胞分类计数临床检验基础实验王梅江苏大学基础医学与医学技术学院临床检验与输血教研室涂片技术是制备血液样品最常用的技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可对血液中各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、细胞大小测量等工作。血涂片制备推片载玻片血液一张满意的血涂片应厚薄均匀头体尾鲜明涂片干燥后用铅笔在血涂片的头部写上姓名和编号李四B123方法与步骤推片：挤出第二滴血置于载玻片的右侧再取另一张边缘光滑的双凹片，斜置于血滴的前缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线状。30~45°两玻片的角度以30-45°为宜，轻轻将双凹片向前匀速推进，即涂

2、成血液薄膜。血涂片不良血涂片实验用品器材:医用一次性采血针、酒精棉球、经脱脂洗净的载玻片、双凹片（推片）。试剂:Wright’s（瑞氏）染液：Wright’s色素粉末0.1g，溶于60ml甲醇。瑞氏染色原理瑞氏粉是由伊红和美蓝混合后组成的一种中性盐染料。伊红是一种酸性染料，为伊红钠盐，其有色部分为阴离子；美蓝是一种碱性染料，为氯化美蓝，有色基团为阳离子。如以M+代表美蓝，以E-代表伊红。将适量的ME溶解在甲醇中，即成为瑞氏染液。甲醇的作用可使ME溶解，解离为M+和E－，这两种有色离子可以选择性地吸附血细胞内的不同成分而着色。各种细胞及细胞的各种成分由于其化学性质不同，对各种

3、染料的亲和力也不一样，因此，在血片上可以见到不同的着色。细胞中碱性物质与酸性染料伊红结合染成红色；细胞中的酸性物质可与染液中的碱性染料美蓝结合染成蓝色；当细胞含酸、碱性物质各半时，它们既与酸性染料作用，又与碱性染料作用，染成淡紫红色。瑞氏染色原理血涂片染色勿冲洗再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴后将Ⅰ液和Ⅱ液充分混匀静置10分钟直接流水冲洗3-5分钟（切勿先倒掉染液）涂片经水洗干燥后用油镜分类计数100个白细胞李四123涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴覆盖整个血膜1分钟染色浓染：待涂片在空气中完全干燥后，滴加数滴Wright’s染液盖满血膜为止，染色3～5min。淡染：然后滴加等量缓

4、冲液，使其与染液均匀混合，静置10～15min。用流水冲去染液，吸水纸吸干，镜检。血涂片的观察低倍镜观察1.染色情况(满意、偏酸、偏碱）2.细胞分布情况油镜下分类计数：体尾交界处。油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。（共计数100个白细胞）李四123体尾交界处理想区域细胞重叠细胞太稀理想区域各类成熟白细胞的形态学：中性粒细胞（Ne）：在瑞氏染色血涂片上呈圆形，直径10～13µm，胞浆染粉红色，核形一叶（杆状核）至五叶不等，以三叶者多见，染成深紫红色，胞浆中有许多细小均匀紫红色颗粒。嗜酸性粒细胞（Eo）：较中性粒细胞稍大，胞核多为两叶，呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫红色

5、，胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒，瑞氏染色时呈桔红色，有折光性。嗜碱性粒细胞（Ba）：胞浆中含有大小不等的嗜碱性颗粒，瑞氏染色时呈兰黑色。于光学显微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；核呈淡紫红色常看不清，呈杆状或分叶状。淋巴细胞（Ly）：胞体呈圆形，直径介于6～15µm之间，在成人血涂片中以小淋巴细胞为多见，直径6～9µm，核大呈深紫色致密而浓染，胞浆量极少；大淋巴细胞胞浆量较多，呈清澈的淡蓝色，可见少量嗜苯胺蓝颗粒，胞核圆或椭圆，常偏向细胞一侧，染色较深。单核细胞（Mo）：在瑞氏染色涂片上为12～20µm，胞体圆形、椭圆形或不规则形；

6、核形多种多样，最重要的特点是染色质较细致疏松，呈丝网状或条缕状，着色较淡胞浆较多，淡兰色，含大量细小尘土样颗粒。中性粒细胞嗜酸性粒细胞淋巴细胞嗜碱性粒细胞（右）单核细胞血小板涂片制备的注意事项染色操作注意事项染色质量的控制