实验一 特殊显微镜的工作原理和使用.ppt

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1、实验一特殊显微镜的工作原理和使用放大倍数和数值孔径10/0.25，40/0.65，100/1.3标准机械筒长和盖玻片厚度160/0.17160/0或160/160/-∞/0或∞/-油浸物镜：oil、oel、Hi等水浸物镜：W或Water甘油浸物镜：Glyz和Glye复消色差物镜：APO半复消色差物镜：FL平场物镜：PL特殊显微镜是与明视场普通显微镜相对而言，在成像原理、结构和用途上存在差异的显微镜。这里介绍：1、暗视场显微镜2、相差显微镜3、荧光显微镜一、暗视场显微镜应用：微小粒子、细菌形态、细菌记数，透明标本观察等。(一)原理和结构特点在日常生活中，室内飞扬的微

2、粒灰尘是不易被看见的，但在暗的房间中若有一束光线从门缝斜射进来，灰尘便粒粒可见了，这是光学上的丁达尔现象。暗视场显微镜就是利用此原理设计的。丁达尔现象暗视场显微镜是在普通光学显微镜中去除明视场聚光器，换上一个暗视场聚光器而成。它的结构特点主要是使用中央遮光板或暗视场聚光器，常用的是抛物面聚光器，使光源的中央光束被阻挡,不能由下而上地通过标本进入物镜。从而使光线改变途径，倾斜地照射在观察的标本上。明场普通显微镜成像光路图暗场照明光路图成像特点及优缺点在暗视野中所观察到的是被检物体的衍射光图像,并非物体的本身，所以只能看到物体的存在和运动，不能辨清物体的细微结构，只能

3、呈现出物体的轮廓而且比实物要大。但被检物体为非均质时，并大于1／2波长，则各级衍射光线同时进入物镜，在某种程度上可观察物体的构造。一般暗视野显微镜虽看不清物体的细微结构，但却可分辨0.004um以上的微粒的存在和运动，这是普通显微镜(最大的分辨力为0.2um)所不具有的特性，可用以观察活细胞的结构和细胞内微粒的运动等。(二)制作中央遮光板普通显微镜只要聚光器是可以拆卸的，支架的口径适于安装暗视野聚光器，即可改装成暗视野显微镜。在无暗视野聚光器时，可用厚黑纸片制作一个中央遮光板，放在普通显微镜的聚光器下方的滤光片框上，也能得到暗视野效果。(1)．将显微镜聚光器调到最

4、高位置，用低倍镜对好焦距。(2)．取下目镜，从镜筒中观察并调节光阑的大小，使其与镜筒中所见物镜的视野相等。(3)．用厚黑纸剪制中央挡光板。外圈直径与滤光片框架相同，中央部分的大小与调节好的光阑孔径一样(可用半透明的小纸片，放在通光孔处聚光镜镜面上，纸上显示的光斑即为光阑的孔径，再用圆规量取大小)。(4)．将中央挡光板放在滤光片框架上，开大光阑进行样品观察。如需使用高倍镜作暗视野观察，应按高倍镜对焦后的视野大小重新制作中央挡光板。要求与注意事项(1)制作标本时所用的载玻片和盖玻片均应清洁干净，必须使用薄玻片(载玻片厚度约1.O～1.1mm，盖玻片厚度约0.1mm)，

5、否则会影响暗视野集光器斜射光焦点的调节，如载玻片太厚，焦点只能落在载玻片内，就不能看到物像。标本也不能过厚。(2)采用的光源宜强，一般均用强光灯照明。光线暗则物像不清晰。(3)调节光源：使光线集中在暗视野集光器上。先用低倍镜观察，移动暗视野集光器，使其中央的一个圆圈恰好处在视野的中央。如暗视野集光器已准确固定好，则可免去这一步骤。(4)先在暗视野的集光器上加香柏油一滴，然后将标本放在载物台上，把暗视野集光器向上移，使其上的柏木油与标本片的底面接触，中间不能有气泡存在。(5)高倍观察：在标本盖玻片上再加香柏油一滴，降下镜筒，使油镜浸在香柏油内，再用粗、细螺旋调节物镜

6、的焦距，有时还需稍微升降暗视野集光器以调节斜射光焦点，使其正好落在标本上，并且调节油镜头的光圈，相互配合，直到物像清楚为止，即可开始检查。也可用低倍或高倍物镜进行镜检，这就不必在盖玻片上加香柏油。普通显微镜暗视场显微镜相差显微镜人口腔上皮细胞在不同显微镜下的图像（二）相差显微镜原理和结构特点光波有振幅（亮度）、波长（颜色）及相位(指在某一时间上光的波动所能达到的位置)的不同。当光波遇到物体时，其波长(颜色)和振幅(亮度)发生变化，于是就能看到物体，当光波通过透明的物体时，虽然物体的内部不同结构会有厚度和折光率不同的差异，而波长和振幅则仍然是不会发生改变的。因此，就

7、不易看清这些不同的结构。用普通光学显微镜观察一些活的微生物或其他细胞等透明物体时，也就不易分清其内部的细微结构。但是，光线通过厚度不同的透明物体时，其相位却会发生改变，形成相差。不过，相差不表现为明暗和颜色的差异，这种微小的变化，人眼是无法加以鉴别的，故在普通显微镜下难以观察到。我们可以利用光学的相干干涉原理，可以把相差改变为振幅差，这样就能使透明的、厚度和性质不均匀的结构表现明暗的不同，能够较清楚地予以区别。如果这两条光波射到光屏的同一点上，而且一条光波比另一条光波迟滞了半个波长，即两条光波因位相相反而互相干涉抵消则光线消失，或者相对振幅相互影响而光线减弱。如果

8、一条光波虽