实验一特殊显微镜及其使用ppt课件.ppt

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1、细胞生物学实验汕头大学生物系游翠红本实验课共36学时，由12个实验组成。实验内容1、特殊显微镜及其使用2、线粒体和叶绿体的分离3、巨噬细胞的吞噬实验4、ACP、过氧化物酶等的显示5、小鼠骨髓细胞染色体标本的制备6、动物细胞染色体分带技术实验要求永久制片—实验开始前细查张数及有无破损清点器械实验报告实验室卫生节约规范实验一特殊显微镜及流式细胞仪的使用1、口腔上皮细胞2、活细胞（细胞系）3、培养的紫菜或小新月菱形藻4、流式细胞仪的演示实验所需的材料：实验所需的试剂：香柏油、乙醚:酒精=7:3暗视野显微镜、相差显微镜、荧

2、光显微镜实验目的：掌握暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜及流式细胞仪的原理、构造及其使用方法。学习特殊显微镜操作的目的：暗视野显微镜：看到运动的物体，利用目标物体的轮廓与背景区分开荧光显微镜：辨别含有荧光物质所在的位置一、暗视野显微镜1.原理利用暗视野聚光器（或挡板）使入射光束的中央光束被阻挡．不能由下而上地通过标本进入物镜，只能倾斜地照射在观察的标本上。标本遇光发生反射或散射，物镜接触不到入射光源的光线，只能接触标本的反射和散射光。因而整个视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的，使在黑暗的背景上呈现出明亮的像。丁达

3、尔现象斜向照明2.操作方法（P14）安装暗视野聚光器（或挡板），放在普通显微镜的聚光器下方。加香柏油：把被检样品的标本置于载物台上，并在聚光器透镜的上表面滴香柏油。向上缓慢调升聚光镜，使香柏油与载玻片下表面缓缓接触。加香柏油的原因，避免照明光线于聚光镜上进行全反射，达不到被检物体。聚光器光轴的调中：用低倍镜对样品聚焦，随之用聚光器升降螺旋上下缓慢调节聚光器位置，当暗视野中清楚地窥见一光环或圆形光点时停止什降聚光器，用聚光器调中杆推动聚光器，把光环或光点调至视野中心；调节聚光器焦点，使之位于被检样品处，转动聚光器升降

4、螺旋，使视野中光环调成一最小的圆形光点，此刻聚光器的焦点恰好位于样品处。注意事项物镜的数值孔径必须小于聚光器的数值孔径；制作标本时所用的载玻片和盖玻片均应清洁无痕；必须使用薄玻片(载玻片厚度约0.8~1.1mm，盖玻片厚度约0.1mm)，否则会影响暗视野集光器斜射光焦点的调节，如载玻片太厚，焦点只能落在载玻片内，就不能看到物象；标本也不能过厚。采用的光源宜强，一般均用强光灯照明。光线暗则物象不清晰。用途：1）利用样品的散射光和反射光进行观察，只能看到物体的存在和运动，不能辩其细微结构；2）可以看到许多细胞器的明亮轮

5、廓，如细胞核，线粒体、液泡等3.实验内容、材料与仪器内容：口腔上皮细胞的观察材料：口腔上皮细胞试剂：蒸馏水器材和仪器：载玻片、盖玻片、显微镜、牙签二、相差显微镜1原理光波有振幅（亮度）、波长（颜色）及相位(指在某一时间上光的波动所能达到的位置)的不同。当光通过物体时，如波长和振幅发生变化，人们的眼睛才能观察到。而活细胞和未经染色的生物标本，因细胞各部微细结构的折射率和厚度略有不同，光波通过时，波长和振幅并不发生变化，仅相位有变化(相应发生的差异即相位差)，而这种微小的变化，人眼是无法加以鉴别的，故在普通显微镜下难以

6、观察到。相差显微镜能够改变直射光或衍射光的相位，并且利用光的衍射和干涉现象，把相位差变成振幅差(明暗差)，同时它还吸收部分直射光线，以增大其明暗的反差。相差：同一光线经过折射率不同的介质其相位发生变化并产生的差异。相差决定于光波所通过介质的折射率之差及其厚度，等于折射率与厚度的乘积之差（光程差），介质越厚或折射率越大，光波减速也越大。肉眼看不到的相差，利用光的衍射和干涉现象，把相位差变成振幅差(明暗差)，就可以看到。相差显微镜与普通显微镜的主要不同之处是：1）用环状光阑代替可变光阑2）用相差物镜(通常标有PH的标记

7、)代替普通物镜；3）带有一个合轴调中望远镜CT:用于环状光阑的环孔与相差物镜相板共轭面的环孔（暗环）在光路中准确合轴，使成像的相位差变为振幅差；4）有绿色滤色片：用于消色，可吸收红色和蓝色光，只透过绿光，使波长范围小的单色光线进行照明，并有吸热作用，能使相差观察获得良好的效果2结构特点1.灯箱2.滤色片座3.相衬环杆4.相衬环调节螺钉5.目镜6.三目头7.手轮松紧张力圈8.粗动调焦手轮9.电源插头10.电源插座11.微动调焦手轮12.物镜13.载物台14.聚光镜调节螺钉15.聚光镜托架16.孔径光栏调节转环17.灯

8、座调节螺钉18.视场光栏调节手柄19.聚光镜固紧螺钉20.聚光镜升降手轮21.移动工作台22.纵向移动手轮23.横向移动手轮24.电源开关25.亮度调节旋钮26.移动机构固紧螺钉27.升降限位固紧手柄28.镜筒固紧螺钉29.观察摄像拉杆30.集光镜调节手柄31.聚光镜刻度处3使用方法：倒置相差显微镜（科技楼516室）的使用方法：先打开电源开关，再打开汞灯，然