层孔菌乙酸乙酯提取物的分离与纯化开题报告

《层孔菌乙酸乙酯提取物的分离与纯化开题报告》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、开题报告层孔菌乙酸乙酯提取物的分离与纯化一、选题的背景、意义目前，大量的研究证实多数层孔菌属的真菌多糖有较好的生物学活性，其中对裂蹄木层孔菌的研究较多，它能够调节细胞免疫和体液免疫，而其抗肿瘤活性明显优于其他担子菌．王稳航等首次对松木层孔菌子实体多糖的抗氧化性进行了研究[1]。结果表明，多糖抗氧化效果较好，对超氧阴离子自由基的清除率达到90％以上，丙二醛生成抑制率达到65％左右[2]。目前国内外对松木层孔菌多糖结构的研究还未见报道[3]。本文以发酵培养的松木层孔菌为材料，主要研究了碱提松木层孔菌菌丝体多糖的结构特点，并初步研究多糖对离体脾细胞增殖的影响，证明其对体外

2、淋巴细胞增殖有显著作用[4]。二、相关研究的最新成果及动态主要结果如下:1.通过形态学,生理生化特征,以及ITS序列分析,对实验室前期分离到的层孔菌L8菌株进行了鉴定,确定其为木蹄层孔菌（GeneBankno.DQ513402）[5]。在明确菌种后，通过反复实验,构建了木蹄层孔菌L8的液体深层发酵培养方法,并优化了其发酵工艺。结果表明当发酵培养基组成为：葡萄糖5%,蚕蛹水解液1%，酵母粉0.5%，KH2PO40.05%,MgSO40.05%;发酵条件为：温度25℃,初始pH5.0,转速100rpm,通气量1.0vvm，接种体积10%（v/v），发酵周期6天时,层孔菌

3、L8的菌丝生物量最大,可达18.11±1.08g/L,是优化前的2.3倍[6]。2.对层孔菌L8的发酵菌粉进行了动物药效学实验，结果表明层孔菌L8的发酵菌粉在剂量为1.5g/kg时对小鼠S180肉瘤有一定的抑制作用,和阴性对照组相比，平均抑瘤率为23.5%（P＜0.05）[7];进一步发现该剂量给药组的荷瘤鼠的平均胸腺重量为68.5mg,显著大于阴性对照组的57.5mg（P＜0.05）,而该剂量组荷瘤鼠的平均肝脏重量为230.1mg,同阴性对照组相当（239.7mg）；相比之下，阳性对照组1.25mg/kg顺铂的抑瘤率虽然高达64.7%，但是同阴性对照组相比，顺铂处

4、理后，荷瘤鼠的胸腺和脾脏的重量都显著下降[8]。另外从给药前后荷瘤鼠的体重变化也可以看出,层孔菌L8的发酵菌粉给药后,荷瘤鼠的体重比给药前都有所增加。以上结果表明层孔菌L8的发酵菌粉,在肿瘤治疗方面,具有潜在的开发价值[9]。3.采用体外人源的肿瘤细胞作为筛选模型,对10余种层孔菌进行了抗肿瘤活性评价和活性成分的分析,结果发现Hispolon为一些层孔菌中共有的一个活性成分,并发现Hispolon对许多肿瘤细胞表现出剂量依赖性的生长抑制作用,其中对胃癌细胞SGC-7901的活性较好,作用72h后的IC50低于10μg/mL。[10]4.利用动态荧光可视技术,流式细胞

5、术,Western-blot等现代肿瘤细胞学和分子药理学的技术和方法,深入研究了Hispolon诱导胃癌细胞死亡的分子机理。结果发现Hispolon可以诱导胃癌细胞发生一种特殊的ROS介导的线粒体途径的凋亡。该凋亡机制如下所述:Hispolon通过将细胞内的GSH驱逐出细胞外,使得细胞内的GSH含量下降;同时抑制细胞中的谷胱甘肽过氧化物酶GPX的活性,使得胃癌细胞的抗氧化能力大大下降,从而导致ROS的急剧增加。大量的ROS积聚引起了线粒体膜的氧化损伤,破坏了线粒体膜的完整性,导致线粒体膜的通透性增加,使得线粒体中的细胞色素C大量释放出来,激活了Caspase的级联反

6、应,启动凋亡程序,最终引发细胞发生凋亡。相比之下,当Hispolon作用正常的胃粘膜上皮细胞后,ROS并没有显著增加,细胞也没有发生明显的死亡。探索造成这种差异的原因时,我们发现胃癌细胞本身固有的ROS水平比正常的胃上皮细胞要高,这使得胃癌细胞对Hispolon更加敏感。因为胃癌细胞依靠GSH来清除过多的ROS,当Hispolon作用之后,GSH抗氧化系统受到了破坏,严重影响了细胞的抗氧化能力,导致大量的ROS增加,引发了细胞死亡;相比之下,由于正常胃上皮细胞本身固有的ROS水平比较低,当Hispolon作用后,ROS并没有显著增加,其氧化压力处于细胞所能承受的范围

7、之内,因而细胞没有发生死亡。[11]5.低剂量的Hispolon（2.5μg/mL）可以显著地增加化疗药物（丝裂霉素C,5-氟尿嘧啶,阿霉素）对胃癌细胞SGC-7901的杀伤性。并且这种增敏机制是通过引发胃癌细胞中的GSH急剧下降,导致了ROS的大量积聚,进而引发了细胞死亡。综上所述,本论文的研究结果为解决层孔菌类药用真菌的人工资源化问题,深入研究其活性成分的作用机制提供了一种思路和方法,并为层孔菌类药用真菌的新药创制提供了一定的依据[12]。三、课题的研究内容及拟采取的研究方法（技术路线）、难点及预期达到的目标经水提的菌丝体残渣,烘箱干燥,称取5克干燥的松木层