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《GB4789.30-2010食品微生物学检验单核细胞增生(发布稿.仅供参考-标准分享网).pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中华人民共和国国家标准GB4789.30—2010食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验NationalfoodsafetystandardFoodmicrobiologicalexamination:Listeriamonocytogenes2010-03-26发布2010-06-01实施中华人民共和国卫生部发布GB4789.30—2010前言本标准代替GB/T4789.30-2008《食品卫生微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》。本标准与GB/T4789.30-2008相比,主要变化如下:——修改了标准的中英文名称;——删
2、除“第二法全自动酶链荧光免疫分析仪筛选法”;——删除“第三法全自动病原菌检测系统筛选法”。本标准的附录A为规范性附录。本标准所代替标准的历年版本发布情况为:——GB4789.30-1994、GB/T4789.30-2003、GB/T4789.30-2008。IGB4789.30—2010食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验1范围本标准规定了食品中单核细胞增生李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)的检验方法。本标准适用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验。2设备和材料除微生物实验室常规无菌及培养设备外,其他设备和
3、材料如下:2.1冰箱:2℃~5℃。2.2恒温培养箱:30℃±1℃、36℃±1℃。2.3均质器。2.4显微镜:10×~100×。2.5电子天平:感量0.1g。2.6锥形瓶:100mL、500mL。2.7无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)。2.8无菌平皿:直径90mm。2.9无菌试管:16mm×160mm.。2.10离心管:30mm×100mm。2.11无菌注射器:1mL。2.12金黄色葡萄球菌(ATCC25923)。2.13马红球菌(Rhodococcusequi)。2.14小白鼠:16g~18g。2.15全自动微生物
4、生化鉴定系统。3培养基和试剂3.1含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤(TSB-YE):见附录A中A.1。3.2含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂(TSA-YE):见附录A中A.2。3.3李氏增菌肉汤LB(LB1,LB2):见附录A中A.3。1GB4789.30—20103.41%盐酸吖啶黄(acriflavineHCl)溶液:见附录A中A.3.2.1。3.51%萘啶酮酸钠盐(naladixicacid)溶液:见附录A中A.3.2.1。3.6PALCAM琼脂:见附录A中A.4。3.7革兰氏染液:见附录A中A.5。3.8SIM动力培养基:见附录A中A.6
5、。3.9缓冲葡萄糖蛋白胨水[甲基红(MR)和V-P试验用]:见附录A中A.7。3.105%~8%羊血琼脂:见附录A中A.8。3.11糖发酵管:见附录A中A.9。3.12过氧化氢酶试验:见附录A中A.10。3.13李斯特氏菌显色培养基。3.14生化鉴定试剂盒。2GB4789.30—20104.检验程序单核细胞增生李斯特氏菌检验程序见图1。检样25g(mL)样品+LB1增菌液225mL,均质30℃±1℃,24h0.1mL+10mLLB2增菌液30℃±1℃,18h~24h李斯特氏菌显色培养基PALCAM琼脂36℃±1℃,24h~48h接种木糖、鼠李糖,36
6、℃±1℃,24h;同时于TSA-YE平板划线纯化,30℃±1℃,24h~48h木糖-,鼠李糖+鉴定结果报告图1单核细胞增生李斯特氏菌检验程序5操作步骤5.1增菌以无菌操作取样品25g(mL)加入到含有225mLLB1增菌液的均质袋中,在拍击式均质器上连续均质1min~2min;或放入盛有225mLLB1增菌液的均质杯中,8000r/min~10000r/min均质1min~2min。于30℃±1℃培养24h,移取0.1mL,转种于10mLLB2增菌液内,于30℃±1℃培养18h~24h。5.2分离取LB2二次增菌液划线接种于PALCAM琼脂平板和李斯
7、特氏菌显色培养基上,于36℃±1℃培养24h~48h,观察各个平板上生长的菌落。典型菌落在PALCAM琼脂平板上为小的圆形灰绿色菌落,周围有棕黑色水解圈,有些菌落有黑色凹陷;典型菌落在李斯特氏菌显色培养基上的特征按照产品说明进行判定。5.3初筛自选择性琼脂平板上分别挑取5个以上典型或可疑菌落,分别接种在木糖、鼠李糖发酵管,于36℃±1℃培养24h;同时在TSA-YE平板上划线纯化,于30℃±1℃培养24h~48h。选择木糖阴性、鼠李糖阳性的纯培养物继续进行鉴定。3GB4789.30—20105.4鉴定5.4.1染色镜检:李斯特氏菌为革兰氏阳性短杆菌,
8、大小为(0.4μm~0.5μm)×(0.5μm~2.0μm);用生理盐水制成菌悬液,在油镜或相差显微镜下观察
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