国家标准：gb 4789.30-2010发布稿 食品微生物学检验 单核细胞增生 发布稿

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1、中华人民共和国国家标准GB4789.30—2010食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验NationalfoodsafetystandardFoodmicrobiologicalexamination:Listeriamonocytogenes2010-03-26发布2010-06-01实施中华人民共和国卫生部发布GB4789.30—2010前言本标准代替GB/T4789.30-2008《食品卫生微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》。本标准与GB/T4789.30-2008相比，主要变化如下：——修改了标准的中英文名称；——

2、删除“第二法全自动酶链荧光免疫分析仪筛选法”；——删除“第三法全自动病原菌检测系统筛选法”。本标准的附录A为规范性附录。本标准所代替标准的历年版本发布情况为：——GB4789.30-1994、GB/T4789.30-2003、GB/T4789.30-2008。IGB4789.30—2010食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验1范围本标准规定了食品中单核细胞增生李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)的检验方法。本标准适用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验。2设备和材料除微生物实验室常规无菌及培养设备外，其他设

3、备和材料如下：2.1冰箱：2℃～5℃。2.2恒温培养箱：30℃±1℃、36℃±1℃。2.3均质器。2.4显微镜：10×～100×。2.5电子天平：感量0.1g。2.6锥形瓶：100mL、500mL。2.7无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）。2.8无菌平皿：直径90mm。2.9无菌试管：16mm×160mm.。2.10离心管：30mm×100mm。2.11无菌注射器：1mL。2.12金黄色葡萄球菌（ATCC25923）。2.13马红球菌（Rhodococcusequi）。2.14小白鼠：16g～18g。2.15全自动

4、微生物生化鉴定系统。3培养基和试剂3.1含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤（TSB-YE）：见附录A中A.1。3.2含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂（TSA-YE）：见附录A中A.2。3.3李氏增菌肉汤LB（LB1，LB2）：见附录A中A.3。1GB4789.30—20103.41%盐酸吖啶黄（acriflavineHCl）溶液：见附录A中A.3.2.1。3.51%萘啶酮酸钠盐（naladixicacid）溶液：见附录A中A.3.2.1。3.6PALCAM琼脂：见附录A中A.4。3.7革兰氏染液：见附录A中A.5。3.8SIM动力培养基：见附录A

5、中A.6。3.9缓冲葡萄糖蛋白胨水[甲基红（MR）和V-P试验用]：见附录A中A.7。3.105%～8%羊血琼脂：见附录A中A.8。3.11糖发酵管：见附录A中A.9。3.12过氧化氢酶试验：见附录A中A.10。3.13李斯特氏菌显色培养基。3.14生化鉴定试剂盒。2GB4789.30—20104.检验程序单核细胞增生李斯特氏菌检验程序见图1。检样25g(mL)样品+LB1增菌液225mL，均质30℃±1℃，24h0.1mL+10mLLB2增菌液30℃±1℃，18h～24h李斯特氏菌显色培养基PALCAM琼脂36℃±1℃，24h～48h接种木糖、鼠

6、李糖，36℃±1℃，24h；同时于TSA-YE平板划线纯化，30℃±1℃，24h～48h木糖－，鼠李糖＋鉴定结果报告图1单核细胞增生李斯特氏菌检验程序5操作步骤5.1增菌以无菌操作取样品25g（mL）加入到含有225mLLB1增菌液的均质袋中，在拍击式均质器上连续均质1min～2min；或放入盛有225mLLB1增菌液的均质杯中，8000r/min～10000r/min均质1min～2min。于30℃±1℃培养24h，移取0.1mL，转种于10mLLB2增菌液内，于30℃±1℃培养18h～24h。5.2分离取LB2二次增菌液划线接种于PALCAM琼

7、脂平板和李斯特氏菌显色培养基上，于36℃±1℃培养24h～48h，观察各个平板上生长的菌落。典型菌落在PALCAM琼脂平板上为小的圆形灰绿色菌落，周围有棕黑色水解圈，有些菌落有黑色凹陷；典型菌落在李斯特氏菌显色培养基上的特征按照产品说明进行判定。5.3初筛自选择性琼脂平板上分别挑取5个以上典型或可疑菌落，分别接种在木糖、鼠李糖发酵管，于36℃±1℃培养24h；同时在TSA-YE平板上划线纯化，于30℃±1℃培养24h～48h。选择木糖阴性、鼠李糖阳性的纯培养物继续进行鉴定。3GB4789.30—20105.4鉴定5.4.1染色镜检：李斯特氏菌为革兰

8、氏阳性短杆菌，大小为（0.4μm～0.5μm）×（0.5μm～2.0μm）；用生理盐水制成菌悬液，在油镜或相差显微镜下观察