GB4789.3-2010食品微生物学检验大肠菌群计数(发布稿.仅供参考-标准分享网).pdf

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1、中华人民共和国国家标准GB4789.3—2010食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数NationalfoodsafetystandardFoodmicrobiologicalexamination:Enumerationofcoliforms2010-03-26发布2010-06-01实施中华人民共和国卫生部发布GB4789.3—2010前言本标准代替GB/T4789.3-2008《食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》。本标准与GB/T4789.3-2008相比,主要修改如下:——修改了标准的中英文名称;——“第二法大肠菌群平板计数法”的平板菌落数的选择范围修改为“

2、15CFU~150CFU”;TM——删除了“第三法大肠菌群Petrifilm测试片法”。本标准的附录A、附录B为规范性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为:——GB4789.3-1984、GB4789.3-1994、GB/T4789.3-2003、GB/T4789.3-2008。IGB4789.3—2010食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数1范围本标准规定了食品中大肠菌群(Coliforms)计数的方法。本标准适用于食品中大肠菌群的计数。2术语和定义2.1大肠菌群coliforms在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。2

3、.2最可能数mostprobablenumber,MPN基于泊松分布的一种间接计数方法。3设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:3.1恒温培养箱:36℃±1℃。3.2冰箱:2℃~5℃。3.3恒温水浴箱:46±1℃℃。3.4天平:感量0.1g。3.5均质器。3.6振荡器。3.7无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。3.8无菌锥形瓶:容量500mL。3.9无菌培养皿:直径90mm。3.10pH计或pH比色管或精密pH试纸。3.11菌落计数器。4培养基和试剂4.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LaurylSu

4、lfateTryptose,LST)肉汤:见附录A中A.1。1GB4789.3—20104.2煌绿乳糖胆盐(BrilliantGreenLactoseBile,BGLB)肉汤:见附录A中A.2。4.3结晶紫中性红胆盐琼脂(VioletRedBileAgar,VRBA):见附录A中A.3。4.4磷酸盐缓冲液:见附录A中A.4。4.5无菌生理盐水:见附录A中A.5。4.6无菌1mol/LNaOH:见附录A中A.6。4.7无菌1mol/LHCl:见附录A中A.7。2GB4789.3—2010第一法大肠菌群MPN计数法5检验程序大肠菌群MPN计数的检验程序见图1。检样25g(mL

5、)样品+225mL稀释液,均质10倍系列稀释选择适宜3个连续稀释度的样品匀液,接种LST肉汤管36℃±1℃48h±2h不产气产气BGLB肉汤36℃±1℃48h±2h不产气产气大肠菌群阴性大肠菌群阳性查MPN表报告结果图1大肠菌群MPN计数法检验程序6操作步骤6.1样品的稀释6.1.1固体和半固体样品:称取25g样品,放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1:10的样品匀液。6.1.2液体样品:

6、以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10的样品匀液。6.1.3样品匀液的pH值应在6.5~7.5之间,必要时分别用1mol/LNaOH或1mol/LHCl调节。3GB4789.3—20106.1.4用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL,沿管壁缓缓注入9mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打,使其混合均匀,制成1:100的样品匀液。6.1.5根据对样品污染状况的估计,按上述操作,依次制

7、成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次,换用1支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕,全过程不得超过15min。6.2初发酵试验每个样品,选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液(液体样品可以选择原液),每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤,每管接种1mL(如接种量超过1mL,则用双料LST肉汤),36℃±1℃培养24h±2h,观察倒管内是否有气泡产生,24h±2h产气者进行复发酵试验,如未产气则继续培养至48h±2h,产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。6.3复发酵试验用接种环从产气的L

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