GB4789.5-2012食品微生物学检验志贺氏菌检验.pdf

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1、中华人民共和国国家标准GB4789.5—2012食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验2012-05-17发布2012-07-17实施中华人民共和国卫生部发布GB4789.5-2012前言本标准代替GB/T4789.5-2003《食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验》。本标准与GB/T4789.5-2003相比，主要变化如下：——修改了标准名称；——修改了培养基和试剂；——修改了操作步骤中增菌部分和生化试验及附加生化试验部分；——修改了表2；——修改了表4。IGB4789.5-2012食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验1范围本

2、标准规定了食品中志贺氏菌(Shigella)的检验方法。本标准适用于食品中志贺氏菌的检验。2设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a）恒温培养箱：36℃±1℃；b）冰箱：2℃～5℃；c）膜过滤系统；d）厌氧培养装置：41.5℃1℃；e）电子天平：感量0.1g；f）显微镜：10×～100×；g）均质器；h）振荡器；i）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头；j）无菌均质杯或无菌均质袋：容量500mL；k）无菌培养皿：直径90mm；l）pH计或pH比色管或精密pH试

3、纸；m）全自动微生物生化鉴定系统。3培养基和试剂3.1志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素：见附录A中A.1。3.2麦康凯（MAC）琼脂：见附录A中A.2。3.3木糖赖氨酸脱氧胆酸盐（XLD）琼脂：见附录A中A.3。3.4志贺氏菌显色培养基。3.5三糖铁（TSI）琼脂：见附录A中A.4。3.6营养琼脂斜面：见附录A中A.5。3.7半固体琼脂：见附录A中A.6。3.8葡萄糖铵培养基：见附录A中A.7。3.9尿素琼脂：见附录A中A.8。2GB4789.5-20123.10β-半乳糖苷酶培养基：见附录A中A.9。3.11氨基酸脱羧酶试验培养基：见附录A中

4、A.10。3.12糖发酵管：见附录A中A.11。3.13西蒙氏柠檬酸盐培养基：见附录A中A.12。3.14粘液酸盐培养基：见附录A中A.13。3.15蛋白胨水、靛基质试剂：见附录A中A.14。3.16志贺氏菌属诊断血清。3.17生化鉴定试剂盒。4检验程序志贺氏菌检验程序见图1。3GB4789.5-2012检样25g（或25mL）样品+志贺氏菌增菌肉汤225mL41.5℃±１℃，16h～20h厌氧培养XLDMAC或志贺氏菌显色培养基36℃±１℃，20h～48h挑取可疑菌落TSI，半固体，营养琼脂斜面血清学分型生化鉴定志贺氏菌属分群及分型结果

5、报告图1志贺氏菌检验程序5操作步骤5.1增菌以无菌操作取检样25g（mL），加入装有灭菌225mL志贺氏菌增菌肉汤的均质杯，用旋转刀片式均质器以8000r/min～10000r/min均质；或加入装有225mL志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中，用拍击式均质器连续均质1min～2min，液体样品振荡混匀即可。于41.5℃±１℃，厌氧培养16h～20h。5.2分离取增菌后的志贺氏增菌液分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板上，于36℃1℃培养20h～24h，观察各个平板上生长的菌落形态。宋内氏志贺氏菌的单个菌落直径大

6、于其他志贺氏菌。若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至48h再进行观察。志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征见表1。4GB4789.5-2012表1志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征选择性琼脂平板志贺氏菌的菌落特征MAC琼脂无色至浅粉红色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐XLD琼脂粉红色至无色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐志贺氏菌显色培养基按照显色培养基的说明进行判定5.3初步生化试验5.3.1自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，分别接种TSI、半固体和营养琼脂斜面各一管，置36℃

7、1℃培养20h～24h，分别观察结果。5.3.2凡是三糖铁琼脂中斜面产碱、底层产酸（发酵葡萄糖，不发酵乳糖，蔗糖）、不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体）、不产硫化氢、半固体管中无动力的菌株，挑取其5.3.1中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验和血清学分型。5.4生化试验及附加生化试验5.4.1生化试验用5.3.1中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验，即β-半乳糖苷酶、尿素、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶苷的分解试验。除宋内氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌13型的鸟氨酸阳性;宋内氏菌和痢疾志贺氏菌1型，鲍氏志

8、贺氏菌13型的β-半乳糖苷酶为阳性以外，其余生化试验志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。另外由于福氏志贺氏菌6型的生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍氏志贺氏菌相似，必要时还需加做靛基质、甘露醇、棉子糖、甘