精子顶体酶活性定量测定.pdf

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1、精子顶体酶活性定量测定试剂准备1、所有试剂充分平衡至室温2、将孵育箱温度精确控制在24℃2、配制精子洗液：以纯化水5倍稀释5×精子浓缩洗液标本准备1、2ml新鲜标本+4ml精子洗液800g离心10min留取底部沉淀物计数精子浓度向反应装置中加入67.0×10个精子2、向反应装置中加入7.0×106个精子1500g离心10min丢弃底部离心管底盖封紧底部。操作步骤1、在缓冲液的小管内加入0.2ml底物结合在一起拧紧（试剂空白和质控无需使用反应装置）．．反应装置倒转2、180°翻转泡沫板，24℃孵育60min。3、180°翻转泡沫板丢弃反应装置反应液小管内和质控管（QC）中各加入10μl

2、终止液，混匀。4、小管内液体以300μl量加入微孔内上机，405nm比色。注意事项1、离心时必须使用水平离心机，严格控制离心力和时间662、精子浓度≥17.5×10/ml。若精子浓度低于17.5×10/ml，则需要重新洗涤一定体积的原始精液将二者合并；从而达到提高精子浓度的目的。3、向反应装置中加入液量应在0.1~0.4ml之间，若精液的加入量<0.1ml，则先在PTFE管中加入所需的精液量后，再补充加入0.1ml的精子洗液，并轻轻摇动混匀。备注缓冲液中加入底物即为反应液