【生物工程专业】【毕业设计】用杆状病毒系统表达丙型肝炎病毒结构蛋白

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1、（20届）毕业论文（设计）用杆状病毒系统表达丙型肝炎病毒结构蛋白IV摘要：：本文利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建了含有丙型肝炎病毒结构蛋白编码基因的重组杆状病毒，并获得HCV结构蛋白在昆虫细胞Sf9中的表达。具体操作步骤如下：用PCR扩增HCV结构区基因，克隆到杆状病毒表达载体pFastBacl中，构建成重组转座载体pFB1-CEE，转化DH10Bac大肠杆菌感受态细胞，筛选阳性菌落，抽提大分子质粒DNA，获得含HCV结构区基因的重组杆状病毒穿梭载体Bac-CEE，脂质体介导转染Sf9昆虫细胞，出现细胞病变后

2、，收集含有重组杆状病毒颗粒的培养上清，重新感染Sf9细胞，收集Sf9细胞，进行12.5%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，可见表达的蛋白条带。HCV结构蛋白在昆虫细胞中的高效表达将为进一步研制适用于人的HCV预防性疫苗打下工作基础。关键词：HCV结构蛋白；杆状病毒表达系统；IVExpressionofHepatitisCVirusStructuralProteinsinInsectCellUsingtheBaculovirusExpressionSystemAbstract:Inthiswork，arecombinantbac

3、uloviruscontainingHepatitisCvirus(HCV)structuralproteincodingsequencewasconstructedbyBac-to-BacrecombinantbaculovirusexpressionsystemanditwasprovedtobeabletoproduceHCVstructuralproteinsdirectlyininsectcells．InthisexperimentHCVstructuralgenewasamplifiedbypolymeras

4、echainreaction(PCR)，andwasinsertedintobaculovirusexpressionvectorpFastBac1toconstructarecombinanttansposingvectorpFB1-CEE.TheplasmidpFB1-CEEwastransformedintoDH10BaccompetentE.colicells.HighmolecularweightDNAwaspreparedfromtheovernightculturesfromtheselectedE.col

5、icolonies，whichwasrecombinantbaculovirusshuttlevectorcontainingHCVstructuralgene，namedBac-CEE.Spodopterafragiperda(Sf9)insectcellsweretransfectedwiththerecombinantBac-CEEvialipofectin.FreshinsectSf9cellswereinfectedwiththerecombinantvirustoexpressthetargetprotein

6、.ThestructuralProteinrecoveringfromtheSf9cellsexhibitedProteinstripe.TheexpressingHCVstructuralproteininthisexperimentwillmakefurtherdevelopmentforHCVpreventivevaccinestudy.Keywords:HCVstructuralprotein;baculovirusexpressionsystemIV目录摘要………………………………………………………………………

7、………………………………IAbstract……………………………………………………………………………………………………II1绪论1一杆状病毒的分子生物学特性1二杆状病毒的基因工程原理1三杆状病毒表达系统的研究进展2四杆状病毒表达系统的优越性3五杆状病毒表达系统在HCV基因工程疫苗中的应用前景32实验材料52.1细胞株、菌株和质粒载体52.1.1Sf9细胞52.1.2大肠杆菌52.1.3质粒52.2主要试剂及配制52.2.1分子生物学试剂52.2.2生化试剂52.3培养液及培养基62.3.1LB培养液及LB平板62.3.2

8、Grace，s昆虫细胞培养液62.4碱法提取质粒主要试剂62.5SDS--聚丙烯酰胺凝胶电泳试剂62.5.130%(W/V)聚丙烯酰胺溶液62.5.2聚丙烯酷胺凝胶电泳缓冲溶液72.6其它主要试剂72.7血清标本72.8实验仪器73实验方法83.1引物合成及HCV结构蛋白区(C-El-E2)基因片段的扩增83.1.1