临床医学论文-乳腺癌转移相关蛋白mRNA定量表达与临床相关性研究

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1、临床医学论文•乳腺癌转移相关蛋白mRNA定量表达与临床相关性研究作者：曹旭晨，肖春花，冯玉梅，李晓青，郝希山【摘要】目的探讨基质金属蛋白酶2(MMP2)和纤维粘连蛋白(Fibronectin,FN)mRNA表达量与乳腺癌转移的关系及临床意义。方法采用荧光定量RTPCR方法检测30例乳腺原发癌和配对淋巴结转移癌以及116例乳腺癌的MMP2和FNmRNA表达量，分析MMP2和FNmRNA表达量与乳腺癌转移及临床病理因素相关性。结果30例淋巴结转移癌的MMP2和FNmRNA表达量低于原发癌，组间比较差异有显着性(P<0.05)o肿瘤直径大、临床分期晚

2、及淋巴结转移数目多的MMP2和FNmRNA农达量低丁•肿瘤宜径小、临床分期早及淋巴结转移数口少的乳腺癌。MMP2和FNmRNA表达量与病理类型、组织学分级、雌、孕激素受体及Her2表达无关。结论随着乳腺癌转移潜能的增加，MMP2和FN在转录水平的表达下调。【关键词】乳腺癌；转移；基质金属蛋白酶2；纤维粘连蛋白Keywords：Breastcancer；Matrixmetalloproteinase2(MMP2)；Fibronectin(FN)；Metastasis乳腺癌转移的重要步骤是基底膜和细胞外基质的降解，基质金属蛋白酶2(MMP2)是此过

3、程中重要的酶类。FN是细胞外基质中的糖蛋口。MMP2降解基底膜和细胞外基质为血管内皮的迁移和新生血管的延伸创造条件，FN参与细胞粘附和基质降解。我们采用荧光定量RTPCR方法检测了30例配对转移癌和116例乳腺原发癌MMP2和FNmRNA定量表达，探讨与乳腺癌转移及临床病理因素的相关性。1资料与方法1.1资料收集本院2002年1月〜2003年12月116例乳腺癌根治术标本,术屮即刻取原发癌和淋巴结转移癌，其中淋巴结转移癌须经病理学评价，选取癌细胞达75%以上的淋巴结。患者年龄32〜79岁，平均49岁。原发癌116例、配对淋巴结转移癌30例；I期

4、17例、II期65例、III期34例;淋巴结阳性68例、淋巴结阴性48例；单纯癌66例、浸润性导管癌28例、髓样癌12例、腺癌10例;组织学分级I级37例、II级46例、III级33例。免疫组化检测ER、PR,阳性细胞数30%以上为阳性；免疫组化方法检测Her2受体，10%以上为阳性。检测外周Ifn.CA153,25U以上为阳性。标本冻存于80°C冰箱屮。收集过程注意避免RNA酶污染。1.2方法1.2.1RNA的提取采用Trizol试剂(InvitTogen公司)提取组织标本RNA,微量核酸定量分析仪(BiochromLtdCambridge)

5、测定浓度并电泳检测RNA质量。1.2.2MMP2和FN引物与Tagman探针采用01igo6.0软件设计引物和探针,管家基因引用文献［11序列。MMP2：Forward5'CGCTCAGATCCGTGGTGAGAT3'Reverse5CGGGAGCTCAGGCCAGAATG3?Probe5J(FAM)TTCTTCTTCAAGGACCGTTCATTTGGC3'(TAMRA)；FNForward5'CCGCCGAATGTAGGACAAGA3'Reverse5'TGCCAACAGGATGACATGAAA3'Probe5'(FAM)CAACCATCTC

6、ATGGGCCCCATTCC3'(TAMRA)；GAPDHForward5?GAAGGTGAAGGTCGGAGTC3，,Reverse5'GAAGATGGTGATGGGATTTC3',Probe5'(FAM)CAAGCTTCCCGTTCTCAGCC3'(TAMRA)o引物和探针由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。1.2.3荧光定量RTPCR实验釆用ThermoscriptTMplus/platinum一步法试剂盒(Invitrogen公司)，反应条件参照说明帖。结果计算：CT值代表每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所进行的循环数。原发癌

7、与配对淋巴结转移癌比较以MMP2和FNmRNA荧光定量结果的CT值减去GAPDH的CT值得到值，以转移癌平均值作为矫止数。计算2AACT值，以2AACT值为RNA表达量。1.3统计学分析采用SpsslO.O软件包，乳腺原发癌与淋巴结转移癌组间比较采用配对t检验，临床病理因索两组间比较采用独立样本t检验，两组以上比较采用方差分析。MMP2和FNmRNA表达量采用线性回归和双变量线性相关分析。2结果2.1乳腺原发癌和淋巴结转移癌的MMP2mRNA表达量30例淋巴结转移癌MMP2和FNmRNA表达量低于原发癌，组间比较差开有显着性(PW0.05),见

8、表1。1.2MMP2和FNmRNA表达量与临床病理因素的关系表130例乳腺癌和转移淋巴结的MMP2和FNmRNA表达MMP2和FNmRNA表达量在肿瘤