植物愈伤组织诱导培养实验指导__李老师

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1、word格式植物组织培养基的配制与植物愈伤组织诱导一、实验目的；通过植物组织培养基和植物愈伤组织诱导实验的学习和训练，使学生了解植物组织培养的基本原理和操作技术，初步掌握MS固体培养基制备方法、外植体的常规灭菌技术以及愈伤组织诱导方法。二、实验原理：根据植物细胞全能性原理，培养植物材料。即在无菌条件下，将植物的器官或组织（如芽、茎尖、根尖或花药）放在人工培养基上进行培养，通过细胞分裂，形成一团薄壁细胞，即愈伤组织。愈伤组织可以在适宜的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下进行再分化，重新产生出植物的各种器官和组织，进而发育成完整的植株。三、

2、实验内容实验包括以下3部分内容：实验1-1、植物组织培养基母液的配制和保存实验1-2、MS培养基的配制与灭菌实验1-3、胡萝卜愈伤组织的诱导实验1-1植物组织培养基母液的配制和保存1、目的要求学习植物组织培养基母液的配制方法，为培养基的配制做准备。2、基本原理 ....word格式植物培养基是植物离体培养的组织或细胞赖以生存的营养基质，是为离体培养材料提供近似活体生存的营养环境，主要包括水、大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、糖、凝固剂和植物生长调节等物质。在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将培养基成分首先配制成比实际培养基浓度大

3、若干倍的母液，然后在配制培养基时，再根据所需浓度，按比例稀释。本实验以MS培养基为例，学习培养基母液的配制。MS培养基母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。另外，还要配制生长激素母液，在不同类型的培养基中使用。3、实验仪器设备和试剂3.1仪器、用具分析天平、酸度计（或pH试纸）、冰箱、药匙、玻棒、称量纸、滴管、洗瓶、记号笔、烧杯（50ml、100ml、200ml）、容量瓶（100ml、500ml、1000ml）、磨口试剂瓶（100mL、200mL、500ml、1000ml）、量杯、量筒、移液抢、微

4、波炉等。3.2试剂（1）95%乙醇、1mol/LNaOH、1mol/LHCl。（2）MS培养基成分：①大量元素(母液Ⅰ)：NH4NO3、KNO3、CaCl2.2H2O、MgSO4.7H2O、KH2PO4；....word格式②微量元素(母液Ⅱ)：KI、H3BO3、MnSO4.4H2O、ZnSO4.7H2O、Na2MoO4.2H2O、CuSO4.5H2O、CoCl2.6H2O；③铁盐(母液Ⅲ)：FeSO4.7H2O、Na2.EDTA.2H2O；④有机成分(母液,维生素和氨基酸)：肌醇、盐酸吡哆醇(维生素B6)、烟酸(Vpp)、盐酸硫胺素(维生素

5、B1)、甘氨酸；（3）植物生长调节物质：2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。4、操作步骤（1）MS大量元素母液的配制按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大10倍，按照表1中的次序分别准确称量后，分别用50ml烧杯，加入蒸馏水30ml溶解（可以加热至60℃～70℃，促其溶解）。溶解后，按顺序倒入一大烧杯中（烧杯中事先加入约50ml的蒸馏水，目的避免由于盐浓度过高使钙离子与磷酸根离子、硫酸根离子形成不溶于水的沉淀），注意最后加入氯化钙溶液，混匀，用250mL容量瓶定容。将配制好的母液倒入试剂瓶中，贴好标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于

6、4℃冰箱中保存备用。表1MS培养基大量元素母液（10倍）的配制剂量母液化合物名称培养基用量（mg/L）扩大倍数称取量(mg)母液体积(mL)1L培养基吸取母液量（mL）KNO31,900104,750250100....word格式大量元素NH4NO31,6504,125MgSO4·7H2O3709,25KH2PO470425CaCl2·2H2O4401,100（2）微量元素母液的配制按照培养基配方的用量，将微量元素各种化合物（除去铁盐）扩大100倍（表2），用万分之一天平分别准确称取，可以混合溶解，最后定容。将配制好的母液倒入试剂瓶中，贴好

7、标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。表2MS培养基微量元素母液（100倍）的配制剂量母液化合物名称培养基用量（mg/L）扩大倍数称取量(mg)母液体积(mL)1L培养基吸取母液量（mL）微量元素MnSO4·4H2O22.310022310010ZnSO4·7H2O8.686H3BO36.262KI0.838.3....word格式Na2MoO4·2H2O0.252.5CuSO4·5H2O0.02510ml*CoCl2·6H2O0.02510ml***、**：因天平均存在误差，为减少误差带来的影响，建议称取0.25

8、g，溶解并定容至10ml容量瓶中，然后移取10ml，加入混合液中。（3）铁盐母液的配制常用的铁盐是FeSO4·7H2O和Na2-EDTA的螯合物，必须单独配成母液。