诺卡氏菌感染对乌鳢主要非特异性免疫指标的影响【开题报告】

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1、毕业论文开题报告水产养殖诺卡氏菌感染对乌鳢主要非特异性免疫指标的影响一、选题的背景与意义乌鳢(Ophicephalusargus)属鲈形目(Perciformes)、鳢科(Ophiocephalidae)、鳢属(Chann)，俗名黑鱼、乌鱼。其肉质鲜美，骨刺少，营养丰富，经济价值高，具有去瘀、生新、补血、调养的功用。乌鳢是典型的肉食性鱼类，适应性强,在缺氧情况下，能借助鳃上器直接从空气中吸收氧，在水少的潮湿淤泥中能生活相当长时间，冬季进行蛰居生活，疾病少,生长快,容易从自然界得到苗种,有利于人工养殖。但是，随着乌鳢人工养殖规模的不断扩大，乌鳢病害也日益严重。特别是近年来在浙江萧山及绍兴一带

2、,频现一种养殖乌鳢大规模死亡的暴发性疾病，现已证实这种疾病系由鰤鱼诺卡氏菌(Nacardiaseriolea)引起的（王国良等2008）。诺卡氏菌(Nocardia)在分类学上属于放线菌目，是一种革兰氏阳性丝状杆菌。广泛分布在土壤、活性污泥、水、动植物和人的组织中，以腐生为主，一些菌株是人和动物的机会致病菌。在水产养殖中，首例报道诺卡氏菌病的是虹彩脂鱼（Hyphessobryconinnesi），以后陆续发生在虹鳟(Oncorhynchusmykiss）、黄尾鰤（Seriolalalandi）、乌鳢、太平洋牡蛎（CrassostreaThunberg）、大口鲈（Micropterussal

3、moides）、海鲈（Lateolabraxjaponicus）和大黄鱼（Pseudosciaenacrocea）等水产养殖动物中。我国鱼类诺卡氏菌病的研究是从2005年，王国良等首次在浙江沿海网箱养殖大黄鱼发现了诺卡氏菌病开始的。以后逐渐有其它鱼类诺卡氏菌病的报道。如2006年广东省佛山市顺德区某淡水养殖场发现乌鳢结节病，经鉴定病原为诺卡氏菌，该病发病持续时间较长，发病率达80%，死亡率达50%；2009年王国良等报道浙江萧山、绍兴乌鳢养殖场发生诺卡氏菌病，造成巨大经济损失；浙江省桐乡市大麻镇水产养殖示范园区共有乌鳢连片养殖池1155亩，在2005年的养殖生产中，乌鳢发病面积687亩，发

4、病率59.5%，死亡率3.6%，总损失105.7万元，平均亩损失914.5元。但是，由于该病是近几年发现的鱼类新疾病，所以目前国内有关于该病的研究资料较少（常藕琴2008，王国良等2009）。近年来鱼类病害发生频繁,其中某些疾病给水产养殖业造成了灾难性的危害，这就使得免疫防治技术在鱼病防治中呈现出日趋广阔的应用前景。因此，对鱼类特别是重要的经济鱼类免疫系统的研究受到国内外学者的广泛关注。鱼类的免疫系统是鱼体执行免疫功能的机构，是产生免疫应答的物质基础，由免疫器官、免疫细胞和体液免疫因子组成。与高等脊椎动物一样，鱼类也是通过免疫系统来抵御外来病原生物的侵害，通过非特异性和特异性的免疫防御机制

5、来维持机体的正常功能及自身内环境的稳定。非特异性免疫可以在微生物入侵时立即发生作用,有效地清除、降解病原微生物和其他有害物质,而此时抗体尚未产生,因而是鱼类抵抗感染的第一道防线。目前，关于鱼类非特异性免疫方面的研究主要集中在饲料添加剂对鱼类非特异免疫功能的影响、药物（如免疫增强剂）对鱼类非特异性免疫功能的影响。如刘华忠（2004）证明了添加1.0%和1.5%的复方中草药的配合饲料均能显著提高鱼体的非特异性免疫能力；刘云等（2004）报道了免疫增强剂可以提高鲫鱼血液中白细胞数量和吞噬细胞的吞噬能力,增强鲫鱼血清中酚氧化酶的活力,对鲫鱼的生长无明显影响。本实验通过对乌鳢人工感染诺卡氏菌，研究其

6、非特异性免疫指标的变化，为乌鳢诺卡氏菌病的防治提供理论参考。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题：研究基本内容：1.诺卡氏菌对乌鳢的人工感染实验。2.健康和感染乌鳢血细胞密度、数量、脆性、血清免疫酶类、溶菌酶活力等主要非特异性免疫指标的测定与分析。拟解决的主要问题：1.样品的采集与处理。2.非特异性免疫指标测定方法的建立。三、研究的方法与技术路线：研究的方法:1.试验用鱼：乌鳢2.实验用菌：鰤鱼诺卡氏菌3.试剂与药品：白细胞稀释液（冰醋酸1.5ml、1%龙胆紫1ml、蒸馏水97.5ml）、溶壁微球菌(Microcrococcuslysodeikticus)、红细胞稀释液（NaCl0.5g、

7、硫酸钠2.5g、氯化汞0.25g、蒸馏水加至100ml）、溶壁微球菌营养琼脂培养基（牛肉浸膏1.5g,蛋白胨2.5g,NaCl4.0g,琼脂7.5g,蒸馏水500mL,pH=7.4）、肝素钠抗凝剂（抗凝剂(葡萄糖20g/L，柠檬酸钠8g/L，EDTA3.36g/L，土温80100μl/L)）、丙酮、乙醚。4.主要仪器：离心机，显微镜，冷冻机，全自动生化分析仪等。5.实验方法：5.1诺卡氏菌悬液的制备：菌株在TSA斜面上2