诺卡氏菌细胞壁肽聚糖粗提物对乌鳢免疫活性的影响【开题报告】

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1、毕业论文开题报告水产养殖诺卡氏菌细胞壁肽聚糖粗提物对乌鳢免疫活性的影响一、选题的背景与意义乌鳢（Ophicephalusargus），亦称黑鱼，属鲈形目，攀鲈亚目，鳢科，鳢属，体呈乌黑色，细长，前部圆筒状，后部侧扁，由背至腹颜色逐渐变浅，圆鳞。乌鳢分布极广，除西部高原地区外，从黑龙江至海南的河川、湖泊、水库、池塘等各种类型的水体皆产此鱼，国外产于朝鲜西、南部。乌鳢肉富含蛋白质、脂肪、18种氨基酸等，还含有人体必需的钙、磷、铁及多种维生素，营养丰富、肉味甘性温且骨刺少，有补脾、利水的药用功能，深受群众的欢迎。乌鳢是一种适应性强、对不良水温、水

2、质及缺氧条件有较强耐受力的鱼类，在江河湖塘等自然环境中很少发病。但随着乌鳢人工高密度养殖的发展，乌鳢各种疾病频频发生，特别是水霉病、腐皮病、腹水病、烂鳃病危害严重，诺卡氏菌病也在近几年流行起来，造成了很严重的经济损失。诺卡氏菌（Nocardia）为革兰氏阳性菌，好氧，分类上属细菌域，厚壁菌门，放线菌纲，放线菌目，诺卡氏菌科。菌体呈长或短杆状,或细长分枝状，常断裂成杆状至球状体，基丝发达，呈分枝状，气丝较少。鱼类诺卡氏菌病于1963年在全球首次报告，确认于阿根廷热带养殖的虹彩脂鱼（Hyphessobryconinnesi）（杜佳根2007）。

3、随后此病又陆续发生在虹鳟（Oncorhynchusmykiss）、黄尾鰤（Seriolalalandi）、乌鳢、大西洋牡蛎（Crassostreagigas）、大口鲈（Micropterussalmoides）和海鲈（Lateolabraxjaponicus）等水产养殖动物中，曾影响日本、美国、澳大利亚、加拿大等地的水产养殖业，造成很大经济损失（袁思平2006）。该病曾是日本水产养殖中最主要的水产动物疾病之一,也是大西洋牡蛎养殖的主要疾病。而该病近年来对我国台湾水产养殖业也产生了较大影响，先后在乌鳢、大口鲈和海鲈等养殖鱼类中发生此病。我国大

4、陆是2006年首次在养殖大黄鱼中发现诺卡氏菌病（王国良2006）。肽聚糖(peptidoglycan)又称粘肽、胞壁质或粘质复合物，由双糖单位，四肽尾还有肽桥聚合而成，是N-乙酰葡萄糖胺（NAG）和N-乙酰胞壁酸（NAMA）交替连接的杂多糖与不同组成的肽交叉连接形成的多层网状大分子结构。其是一种多糖与氨基酸相连的多糖复合物，由于此复合物中氨基酸链不像蛋白质中的那样长，故称肽聚糖。肽聚糖是许多细菌细胞壁的主要成分，不同的肽聚糖中出现的氨基酸数是有限的，亚肽单位及间肽桥上氨基酸的组成及排列上的不同，决定了肽聚糖种类的多样性(和致中　1992)。

5、近年来的大量的研究结果表明，肽聚糖具有包括佐剂活性在内的多种生物活性。肽聚糖能对免疫系统产生不同的免疫调节作用，能够增强机体免疫能力，是一种免疫系统的免疫增强剂。肽聚糖能够刺激B、T淋巴细胞，增强体液免疫和细胞免疫，激活单核细胞及多核白细胞的吞噬活性，活化补体(闻玉梅等　1992)，其分子中的多糖成分还具有抗肿瘤，抗感染能力（Takashi1994）。在水产养殖中投喂肽聚糖后发现，其能显著提高水产动物如五条鰤（Ttami1996）、斑节对虾（SitdhiBoonyaratpalin1995）、日本对虾（Itami1998）等抗病力和成活率。

6、因此，使用肽聚糖有利于解决水产养殖中大量使用抗生素药物防治病害所表现出的生物抗药性问题及食品的药物残留问题。本实验通过对乌鳢人工注射诺卡氏菌细胞壁肽聚糖粗提物，研究其对乌鳢免疫活性指标的影响，为乌鳢诺卡氏菌病的防治提供理论参考。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题：研究基本内容：1.诺卡氏菌细胞壁肽聚糖的分离提取。2.通过腹腔注射的方式，对乌鳢注射诺卡氏菌细胞壁肽聚糖粗提物，研究其对乌鳢免疫活性指标的影响。拟解决的主要问题：1.诺卡氏菌细胞壁肽聚糖的提取方法。2.乌鳢免疫活性指标的筛选及测定方法的建立。三、研究的方法与技术路线：研究的方法:

7、1.试验用鱼：乌鳢2.试验用菌：鰤鱼诺卡氏菌(Nacardiaseriolea)3.试剂与药品：三氯乙酸（TCA）、胰蛋白酶磷酸缓冲液(3mg/mL胰蛋白酶、0.1mol/L磷酸缓冲液、pH8.0)、肝素钠、生理盐水、白细胞稀释液（冰醋酸1.5ml、1%龙胆紫1ml、蒸馏水97.5ml）、溶壁微球菌(Microcrococcuslysodeikticus)、红细胞稀释液（NaCl0.5g、硫酸钠2.5g、氯化汞0.25g、蒸馏水加至100ml）、溶壁微球菌营养琼脂培养基（牛肉浸膏1.5g、蛋白胨2.5g、NaCl4.0g、琼脂7.5g、蒸馏

8、水500mL、pH=7.4）、丙酮、乙醚等。4.主要器材：玻璃缸、注射器、生化自动分析仪、离心机、显微镜等5.实验方法：5.1诺卡氏菌细胞壁肽聚糖粗提物的制备：参考宋晓玲等（20