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《双酶法对乌贼眼中透明质酸提取率的影响【毕业设计】》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、本科毕业设计（20__届）双酶法对乌贼眼中透明质酸提取率的影响目 录1引言11.1透明质酸性质11.2透明质酸提取现状11.3本文的主要研究内容及意义22材料与方法22.1材料与设备22.1.1材料22.1.2设备22.2方法22.2.1酶活力测定22.2.2葡萄糖醛酸标准曲线制作42.2.3透明质酸粗品的制备工艺52.2.4透明质酸的纯化工艺52.2.5透明质酸含量测定52.2.6透明质酸紫外光谱53结果与讨论53.1中性蛋白酶的工艺条件53.2链霉菌蛋白酶酶解条件优化53.2.1酶解时间63.2.2酶解温度63.2.3酶解P
2、H73.2.4酶浓度83.3酶法提取透明质酸的正交试验83.4透明质酸紫外光谱94小结11致谢12参考文献131摘要：透明质酸是生物体内普遍存在的酸性黏多糖，具有独特的黏弹性、生物相容性及非免疫原性，在生命科学、食行业以及医学领域都有较为广泛的应用。本文对乌贼眼液进行双酶提取，首先使用4%中性蛋白酶在60°C下进行4h的酶解，然后用链霉菌蛋白酶进行二次酶解，再通过CTAB络合，乙醇沉淀得到最终透明质酸。最后通过正交实验，优化了链霉菌蛋白酶提取透明质酸的最佳工艺条件，实验结果表明，在酶用量6%，pH为7,酶解时间4h，酶解温度为5
3、5℃时，此时透明质酸的紫外吸光度为1.1970，得到的透明质酸提取率为12.46%，通过紫外-可见光谱对比可看出提取得到的透明质酸纯度较好。关键词：透明质酸；提取；链霉菌蛋白酶；乌贼Abstract：Hyaluronicacidisorganismswidespreadacidicstickypolysaccharide,hasauniqueviscoelastic,biocompatibleandnon-immunogenic,inlifesciences,foodindustryandmedicaldomainhasawid
4、erangeofapplications.Inthispaper,thetwoenzymesextractedsquideyedrops,firsttoconductaneutralproteaseenzyme(enzymeconcentrationwas4%,temperatureof60°C,enzymeextractiontimewas4h)usingcrudeextractobtainedbyHAintermediategoods,thenasecondproteaseenzymeStreptomyces,andthro
5、ughtheCTABcomplexation,alcoholprecipitationfortheultimatehyaluronicacid.Experimentatatemperatureof55°C,pH7.,enzymeextractiontimewas4h,theenzymeconcentrationwas6%,Atthistimeofhyaluronicacidultravioletabsorbance1.1970,getto12.46%extractionrateofhyaluronicacid,andcanbes
6、eenthroughtheUVspectraofhyaluronicacidextractedpuritybetter.Keywords:Hyaluronicacid;extraction;Streptomycesprotease;squid1引言1.1透明质酸性质透明质酸是一种由D-N-乙酰氨基葡萄糖和D-葡萄糖醛酸为结构单元的高分子粘多糖，由于直链轴上单糖之间氢键的作用，透明质酸分子在空间上呈刚性的螺旋柱型[1]，柱的内侧由于存在大量的羟基而产生强烈的亲水性；同时羟基的连续定向排列，又在分子链上形成高度的憎水区，HA分子的亲
7、水和憎水特性，使得浓度低于1‰的HA也能形成连续的三维蜂窝状网络结构，水分子则在网络内通过极性键和氢键与HA分子相结合，使得这些水在柱内固定不动，不易流失，HA亲和吸附的水分约为其本身重量的1000倍，这是其它粘多糖无法比拟的。HA具有独特的分子结构和理化性质，它在有机体内显示出多种重要的生理功能，具有特殊的保湿作用；分子量大的可在皮肤表面形成膜状，起到比较强的保湿润滑作用，而且分子量小的ＨＡ还能被皮肤吸收进入真皮层，促进人体血液循环、改善中间代谢等，从而使皮肤变得光滑、柔嫩[2]，而且透明质酸无致炎性及抗原性，是理想的“粘性手
8、术”材料，对眼科、骨科手术的完成和康复起重要作用[3]，所以被广泛应用于化妆品、医药等方面。但是E.Gura[4]和T.Miyazaki*[5]等人的研究表明，透明质酸的构想受温度、pH、外界机械剪应力以及盐浓度的影响，因此在获得相对分子量分布带比较窄的的透明质
