鳗弧菌卵黄抗体的制备【毕业设计】

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1、本科毕业设计（20__届）鳗弧菌卵黄抗体的制备目录目录21引言12试验材料及仪器22.1试验材料及试剂22.1.1母鸡22.1.2鳗弧菌抗原22.1.3卵黄抗体纯化用试剂22.1.4SDS-PAGE电泳试剂22.1.5ELISA试剂22.1.6透析液22.2试验仪器及耗材23试验方法33.1高免鸡蛋制备33.2卵黄分离33.3卵黄液稀释33.4抗体沉淀33.5抗体透析33.6抗体含量测定33.7抗体纯度检验33.8抗体效价检测34结果与分析44.1抗体纯度检测结果44.2抗体含量测定结果44.3卵黄抗体效价检测结果54.4分析与讨论55小结7致谢8参考文献9摘

2、要：本实验的目的是制备抗鳗弧菌（Vibrioanguillarum）鸡卵黄抗体(IgY)并进行效价检测。具体方法是将蛋鸡经鳗弧菌三次免疫接种后，收集高免鸡蛋，4℃下保存备用；经稀释去脂、盐沉淀抗体法提取卵黄中IgY：卵黄液用0.05mol•L-1，pH5.0的乙酸-乙酸钠缓冲液作10倍稀释，充分搅拌20min后，4℃下静置10小时，10000g离心20min去除脂质，取上清液加入适量饱和（NH4）2SO4，使饱和度达到40%，盐析沉淀抗体，10000g离心20min，除去上清液，将沉淀用PBS透析；采用紫外分光光度法测定蛋白含量，SDS-PAGE电泳检测IgY

3、纯度，ELISA法检测IgY效价。结果：获得了较为纯净的IgY，ELISA效价为1:10240。关键词:鳗弧菌；卵黄抗体；制备；效价Abstract:Thepurposeofthisstudywastoproduceeggyolkimmunoglobulin(IgY)againstVibrioanguillarumandevaluatethettiterofit.Themethodswereasfollowing:LayinghenswerevaccinatedwithformaldehydekilledV.anguillarumfor3timesandthe

4、eggswerecollected.Eggyolkwasdiluted10timesbyaceticbuffer(0.05mol•L-1,pH5.0),stirred20min,extracted10hat4℃.Theextractingsolutionwascentrifuged(10000gfor20minat4℃).Thesupernatantsolutionwasprecipitatedwith40%ammoniumsulfate.TheIgYprecipitatewasresolvedanddialyzedwithPBSbuffer.IgYpurit

5、ywasdetectedwithSDS-PAGEelectrophoresis.IgYtiterwasdetectwithELISA.Result:RelativelypureIgYwasobtained,thetiterofanti-V.anguillarumIgYwas1:10240.Keywords:Vibrioanguillarum;IgY;Production;Titer2011届宁波大学本科毕业论文----鳗弧菌卵黄抗体的制备1引言卵黄抗体（EggYolkImmunoglobauli简称IgY），是指从经特异性免疫的禽蛋卵黄中提取出的针对特定抗原的

6、一种抗体。当用某种抗原免疫产蛋母鸡时，母鸡经免疫应答后，可从其不断产出的鸡卵黄中得到大量均一、高效的卵黄抗体IgY。卵黄抗体的研究始于19世纪末至20世纪初[1]，1893年Klemperer[2]首次报道了鸡蛋中存在抗体。Willianms等1962年发现卵黄免疫球蛋白（Eggyolkimmunoglobulin,IgY）主要存在于禽类的卵黄中[3]。卵黄抗体跟哺乳动物血清抗体相比，有许多独特的优点，主要表现在：绿色环保且无残留；高产低耗、低价且容易获得；性质稳定；识别力及鉴别力强；便于贮存且不易失效[4]，在较长时间内可保持稳定。4℃下，IgY甚至可保存5

7、-10年；室温条件下，可保持抗体活性6个月，甚至在37℃条件下，也可保持活性1个月[5]。卵黄抗体能预防和治疗多种细菌性和病毒性疾病，无任何毒副作用，在很大程度上可替代抗生素和化学合成药物，同时还具有促生长的作用。目前在动物细菌性疾病防治上使用抗生素过多，造成药物残留，破坏环境的同时极大的打击了消费者的信心。近年来卵黄抗体技术的发展为细菌性疾病的治疗提供了更佳选择，它已成为特异性抗体最方便、最廉价的来源，是最佳抗生素替代物。目前它已被广泛地用于许多传染病的防治，尤其是近几年来在人、畜、禽疾病防治上取得了喜人成绩。例如Sugita等（1996）用甲醛灭活的26种

8、病原细菌免疫母鸡后，其产生的IgY，在