利用Caco-2和THP-1共培养模式分析卡拉胶的致炎作用【毕业设计】

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1、本科毕业设计（20__届）利用Caco-2和THP-1共培养模式分析卡拉胶的致炎作用目录中英文摘要1引言11.1卡拉胶的一般特性11.2卡拉胶的重要应用11.3卡拉胶的安全情况11.4卡拉胶的研究进展11.5卡拉胶的研究意义22材料与仪器22.1实验材料22.2仪器23实验方法23.1三种聚合度卡拉胶的制备23.1.1Mw为1-4kDa的卡拉胶样品的制备23.1.2Mw<5000的卡拉胶样品的制备33.1.3Mw<5000的卡拉胶样品的分子量范围确定33.2细胞培养33.3MTT法检测细胞毒33.4检测卡拉胶样品是否被LPS污染33.5卡

2、拉胶对结肠上皮细胞分泌IL-8的影响33.6模型的建立方法33.7ELISA检测卡拉胶刺激模型后细胞分泌IL-8和TNF-α的变化43.8统计学处理44结果44.1MTT法检测卡拉胶样品的细胞毒活性44.2卡拉胶对结肠上皮细胞分泌IL-8的影响结果54.3模型的建立情况64.4卡拉胶刺激模型后细胞分泌IL-8和TNF-α的变化及Caco-2细胞膜层完整性检测结果75讨论8致谢10参考文献11摘要：目的：研究卡拉胶的致炎作用方式。方法：用结肠上皮细胞Caco-2细胞与巨噬细胞THP-1细胞建立共培养模型，待Caco-2分化成单层膜后，用9种

3、卡拉胶样品在低浓度下（10μg.mL-1）作用于该模型，采用ELISA试验分别检测THP-1细胞分泌TNF-α和Caco-2细胞分泌IL-8的情况，以这两种典型的相关炎症因子的产生和变化情况为指标，对卡拉胶的致炎作用机理做出评估。结果：9种卡拉胶样品都会影响Caco-2细胞IL-8的分泌。在模型中，以10μg.mL-1卡拉胶样品作用Caco-2细胞层，发现IL-8分泌与对照组相比有显著的增加。其中，ι<5000刺激时细胞分泌的IL-8与对照组相比增加高达50倍。模型的下层THP-1细胞分泌的TNF-α增幅没有IL-8显著，其中ι<5000

4、作用时THP-1细胞分泌的TNF-α与空白对照组相比增加了3倍。同时，对Caco-2细胞层的完整性进行检测发现，卡拉胶刺激过的模型中的Caco-2细胞层被损坏，而对照组的Caco-2细胞层保持较为完整。结论：卡拉胶引起结肠上皮细胞免疫反应没有结构效应。卡拉胶可能是通过刺激上皮细胞发生免疫级联反应，最终导致上皮细胞层损伤，从而导致炎症的产生。关键词：卡拉胶；肠道炎症；共培养；Caco-2；THP-1Abstract:Aim:Theaimofthisstudyistoexplorethewayofcarrageenan-inducedinfl

5、ammatory.Method:Invitroco-culturedCaco-2andTHP-1cellsmodelwasusedtoestimategutinflammation.9typesofcarrageenansamplesatalowconcentration(10μg.mL-1)acttedonthemodelafterCaco-2cellsdifferentialtintomonolayer,thenTNF-αsecretioninTHP-1cellsandIL-8secretioninCaco-2cellswasdeter

6、minedbyELISA,andthemechanismofinflammationinducedbycarrageenanwasassessedbyobservingtheproductionoftwotypicalinflammatoryfactorsinCaco-2andTHP-1cells.Results:9typesofcarrageenansamplesallaffecttedIL-8secretioninCaco-2cells.Inthisco-culturemodel,IL-8secretionincreasedsigni

7、ficantlywhenCaco-2cellsstimulatedwith10μg.mL-1carrageenan.Inwhich,IL-8secretioninCaco-2cellsincreasedupto50timescomparedtocontrolgroupwhenstimulatedwithι<5000.TNF-αsecretioninTHP-1cellsinthebasolateralsideofthisco-culturemodelincreasedslightlysignificantthanIL-8.Inwhich,T

8、NF-αsecretioninTHP-1cellswas3timeshigherthanthatofcontrolgroupwhenstimulatedwithι<5000.Meanwhile