网上培养caco-2经验总结

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1、上洵细胞先初阪还有我们实总室也有.不知ill丈不如如果爲要和我email联系：hui_anny@i63.com求助：有谁培养过HepG2细胞和Caco-2细胞吗?细胞，培养二求助细胞1境越求助欢迎您访问。雄示：游客只能阅读部份内容.请注册或考甥录后继续浏览全部佶思.谢谢！本人第-次养细胞，目标细胞是Hei»G2细胞和Caco-2細胞.现在在査文fit可足有不少东西都不懂，如我在网上找到的Caco2细胞的培桂足MEM,20%胎牛血清和NEAA.这个？没冇列时怎么配呢？W探过这两种细胞的厠常:播•点经的利！我在此多多感谢了!［本帖最后由1iushen于0861622:13编櫛］3#发表于0

2、8-6-1816:19

3、只看该作者超级版主MEM,胎牛血清，非必需氨基酸欢迎迩访何.提示：游客只能阅读部份内容，请注历或者登录后继续浏览全部佶息，谢谢!MEM足一件细胞培弄液.你可以去公司网站去查，有卖的•有现成的UEM液体，也有MEM干粉，可以自己去配制。20%胎牛血淋就足在液体毘面til入胎牛血淸至终浓度为20S・NEAA是非必需欽基酸吧.我们用的是Gibe。公可的产品.买来的时候足10倍浓发的•用的时候10倍稀祥到培养液中即可.我有簧過用DMEM+FBSKW含PS0.05%然後用trypsin0.25%去做subculture可以了！很好善!Caco-2细胞培养的一点重要经验这个

4、细胞对生长坏境的要求非阳z髙。除了夬家熟知的培斥液箓件的苛刻外（此不详述•又不恆的可留言问）•对生长的空的何题翌求比较航因为在毎一次传代消化的时饥耍消化足够长的时间•要不停地在镜卜•观察细胞的消化状枳这个细胞长的比较耶，所以消化比牧困难•需妾耐心"而消化的结果应该是保证足够多的细胞都是成厲个状态而不是抱团或者成片。对于这一点，常规消化是比牧堆做到的.所以需姿采取点待殊描施，我•般定这样做的:首先吸T•净廉培斥纵加入少債含EDTA的获陽（以下简称YE）润洗•快速•润洗完细胞生长面后啖走撚肓加入适量的YE（我个入-•股较幣用暈多加0.5-1ml）•进行充分的消化.保持在镜下适时观察“待较等

5、细胞被消化下來悬浮于消化液中，大部分细鬼边缘皱缩变淸晰后，用吸管吸出消化液入离心管中加入适晁培养基，當戏离心5分钟左右，离心完毕恢倒上淸，加入侨祥培养基吹打均匀，然后KTiir的小培养瓶中培养•廉培养相中加入埼养基吹打，细胞吹下来之后，适当多吹打几次细胞悬液以使细胞单个分與均匀•然后分叛传代，原瓶拥入新培养庇继续培豫.很多。传入新的培养瓶中之后你可以与原精进行比较。caco-2细胞培养遇到的麻烦。。。般近从上禅细胞库引进一株caco-2（ATCC新引入.夭槪卜代左右吧）.在培养中遇到了不小的麻烦.所以來园子里何问各位达人。简述一下我的操作吧：收到细胞以后.在睜箱里搁了一夜.第二天・换液

6、（自配的培养基：DMEM20%GibcoNCSOJmMEME）.同时留一份自带的尿莽基：一夭后.消化.吸去焙液JJIIPBS洗遍（居撚给冲下来…块细胞…很诡刊，去PBS后再加入0.25%Trypsin3ml.室温放W5mln,鏡F观察细胞仍粘连：去除大部分Trypsin后，放入m,10min...20min...B,当致城的细胞紊密连接：加培芥终止氐发现大部分细胞冲不下來：再进行第二次消化10mm.总篦能冲下细帆且慕本为瑕个。传了两盘・一份加自配的培液•另一份加師细胞自带的培液。一天后.m：细胞贴空的不多.且细胞碎片较多.换液处理（干净多了.呵呵九两天后.观象：原来贴吐的细胞也死了不少

7、・可能有密度依饑吧・稀了长不起來•……很头痛！说明几点情况：1•这次足火车运送（奥运的垠因…），路上耽搁了三天吧：2.0.25%Trypsin自配，用于消化其它的细亂都没有问風3•没有染菌的迹象.呵呵…高手们.给点盘见吧.谢过先！消化时间也太长了吧.可以试试消化一段时间后弃去培养基.然后拍打朝子底部•看看细胞是否脱落•要不就买带EDTA的胺族试试.消化时间太长.对细胞核伤很大可用细胞刮子来刮，细胞消化太久不好的。不过caco-2^是比较好养的，消化个30min也不児得死.因为长的太结实了，细胞有牲合，一定妾消化成单个没什么盘义。N于pbs冲洗脱落M很正常的，长成地後状的细胞M容易被成片

8、冲洗下来的，所以，培养墓，pbs.Sffi热，顺边绛抑入，燃后晃見培养板c动作耍轻.还有一点，有点担心•你的血席浓换足不足太詣了。我曾经用FBS10%（gibcoJ.没问題.后来省钱.用了20%NBS，国产.就出现了很多网页上说的黑胶虫，麻烦的要死.细胞虽然状态不差.但是我还是全扔掉了・所以.建议你降低血淸浓度.戯好用胎牛.憋谢frankcaiX牛的指教！①细胞刮，没用过，感觉太“租暴”了吧・・・・・A.Ar好使么？至于想消成单细胞，主耍是觉得