实验室菌种的使用和管理

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时间:2020-01-13

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1、xxx食品检测中心作业指导书1.目的规范实验室菌种的收集、使用、保管程序;确保实验室的安全。2.范围本管理细则适用于实验室菌种的使用和管理。3.职责3.1菌种保管员:按照本指导书做好菌种的收集、转种、使用、保存和发放以及销毁工作。3.2科室负责人:负责监督菌种的使用及管理。4.管理细则本实验室保存的菌种仅包括一部分致病性较弱的三类细菌、一部分无致病能力的普通细菌和常见真菌。不包括病毒、螺旋体、衣原体、立克次体;保存的菌种主要用于各类培养基、检测试剂的性能测试和质量控制。4.1在本实验室保管的菌种名4.1.1保留工作菌种:大肠杆菌ATCC25922、鼠

2、伤寒沙门氏菌50013、福氏志贺氏菌2aATCC12022、副溶血性弧菌200904-1、金黄色葡萄球菌ATCC25923、表皮葡萄球菌ATCC12228溶血性链球菌23310、铜绿假单胞菌10211、普通变形杆菌,克雷伯氏杆菌,小肠结肠炎耶森氏菌ATCC23715、单核增生李斯特菌ATCC19111、枯草芽胞杆菌ATCC6633b、蜡状芽胞杆菌ATCC11778、白色念珠菌ATCC10231、酿酒酵母ATCC9763、黑曲霉菌、展青霉菌、黄曲霉菌。4.1.2常规检测,科研分离得到的有保留价值的三类/四类菌种根据需要可继续保留;如果在食品中分离到二类

3、/一类菌种,及时送上级单位进一步鉴定,并按规定立即销毁。本实验室不保存一类、二类菌种。4.2菌种的保管4.2.1实验室菌种保存于专用的菌种室。4.2.2菌种保管员及科室负责人双人双锁负责保管菌种。4.2.3使用菌种需提出申请、经科室负责人批准后,向菌种保管员领用。4.2.4菌种应按规定的时间定期转种,一般每转种3代做一次鉴定,如发现污染或变异应及时处理。4.2.5保管人员工作变动时应作好交接工作。4.3菌种的使用和保存4.3.1菌种的类别4.3.1.1实验室内的标准菌种根据用途不同,分为储存菌种、传代用菌种和工作用菌种。①储存菌种:以冷冻干燥保藏为主

4、,用于菌种的长期保存,一般是从菌种保藏中心或专业实验室购买得到的标准菌株,用符号S表示。一般可保存5年。②传代用菌种:采用甘油冷冻管保藏法或液体石蜡覆盖保藏法,用于菌种的传代,用符号G表示。甘油冷冻管保藏法一般可保存2年;③工作菌种:保存于半固体内或琼脂斜面培养基中,作为工作用菌种,用符号W表示。一般可保存1~2个月。4.3.1.2实验室从样品中分离得到的菌株用符号Y表示。4.3.2菌种的接收菌种购到实验室后,应在菌种接收记录上填写所购菌种的信息,如名称、数量和接收日期等。贴好标签后储存于-30℃以下。4.3.3冷冻干燥菌种的恢复培养按菌种保藏中心的

5、要求进行恢复培养。中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)建议的方法如下:①安瓿管开封:用浸过70%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰将安瓿管顶端加热,滴无菌水至加热的安瓿管顶端使玻璃开裂,用锉刀或镊子敲下已开裂的安瓿管的顶端。②菌株恢复培养:用无菌吸管,吸取0.3-0.4ml适宜的液体培养基(如营养肉汤),滴入安瓿管内,轻轻振荡,使冻干菌体溶解呈悬浮状,取约0.2ml菌体悬浮液,移植于指定的琼脂斜面/平板培养基上,剩余的菌液,注入指定的液体培养基内(3-4ml),然后在建议的温度下(一般培养温度32.5℃±2.5℃,18~24h)培养。③注意事项:

6、菌种活化前,请将安瓿管保存在5-10℃的环境下;某些菌种经过冷冻干燥保存后,延迟期较长,需连续两次继代培养才能正常生长。4.3.4菌种的传代从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。按转种次数确定菌种的代数:①冷冻干燥的菌种在液体培养基内恢复培养(第1代)后,转种至平板培养基上得到单个纯菌落,此为第2代。菌种传代一般不超过5代。②鉴定菌种后制甘油冷冻管经菌种特性鉴定后,挑取平板上纯菌落制成浓菌悬液用于制备甘油冷冻管,此作为第2代传代用菌种(G2);同时挑取纯菌落转接斜面,此菌种作为工作用菌种,为第3代(W3)。③将第2代传代用菌种(G2)管冷冻保存(

7、-30℃以下),将第3代工作用菌种(W3)以适当温度下培养适当时间后可用于实验。④取一支冷冻保存的第2代传代用菌种(G2)转种于平板和斜面培养基上,平板上的菌种制成甘油冷冻管,为第3代传代用菌种(G3);斜面培养基经适当温度下培养适当时间后可用作第3代工作用菌种(W3)。⑤当工作用菌种代数小于5时,可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种,如W3可直接转接为W4。⑥按上述程序操作,直至G4转为W5为止,需重新开启安瓿,再重复上述操作程序保藏和使用菌种。4.3.5菌种的保存方法4.3.5.1甘油冷冻管保存法甘油冷冻管保存法适用于保存传代用菌种,一般

8、可保存2年。①将待保存用菌种接种至平板或琼脂斜面,经37℃24~48h培养后,用无菌接种环轻轻刮取菌苔,移至

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