血培养操作规程

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1、血液标本检验程序1.概述：正常人的血液及骨髓是无菌的，当细菌侵入血液时，则可引起菌血症，败血症或毒血症，侵入骨髓可引起严重的骨髓炎。因此细菌学检验对其诊断和治疗具有重要的意义。检验目的：检出血液及骨髓标本中的病原微生物并进行体外药物敏感性试验，为临床抗生素使用提供依据。2.目的：规范微生物血液标本检验程序，以保证微生物检验工作和检验质量的正确进行。3.范围：适用于血液和骨髓标本。4.程序原理：根据培养阳性细菌的形态特点、菌落特征及生化反应特点，鉴定细菌种类，后根据CLSI推荐选择抗生素试验方法。5.血液培养报告要严格遵守三级报告制度和危急值报告制度。

2、6.所用设备：Versa-TREK血培养仪、VITEK2全自动细菌鉴定/药敏分析系统、YQS-II厌氧培养箱、II级生物安全柜、显微镜、恒温培养箱、红外线高温灭菌灯、接种环。7.试剂：成人需氧和厌氧血培养瓶、革兰染色液、各种培养基、Vitek2鉴定卡、K-B药敏和MIC药敏试验试剂、厌氧指示剂、无菌盐水、接种槽、反应板、触酶试剂、氧化酶试剂、凝固酶试剂、药敏纸片等等。8.标本采集：见微生物标本采集和送检程序（YLJY-WSW-PF-6-8）。9.检验程序：9.1本实验室所有血液和骨髓标本均同时进行需氧和厌氧培养(厌氧培养瓶内含85％的N2、1O％CO

3、2、5％H2的厌氧气体)。接到血培养标本后，根据采样时间，在室温放置20-30分钟。9.2将病人信息输入，在仪器上扫描培养瓶条型码。具体操作按Versa-TREK血培养仪标准操作规程进行。9.3培养瓶进入Versa-TREK血培养仪系统后，当被注入样本的培养瓶中有微生物存在时，它们就会在培养液中进行新陈代谢，释放处二氧化碳，CO2+H2O=H2CO3，解离后成H+和HCO3—，在酸性环境下使培养瓶底部灰绿色变成不可褪色的黄色，仪器每10分钟读取数据，一旦计算机系统对检测到的原始数据采用一定的计算法判断被检测样本是否有微生物的存在，此时仪器会自动以声音

4、和屏幕变黄报警，提示有阳性瓶出现。9.4根据“Versa-TREK血培养仪标准操作规程”卸下阳性瓶，根据所检阳性瓶结果选择培养基。如果需氧瓶阳性则选择血琼脂平皿、巧克力琼脂平皿、如果厌氧瓶阳性选择血琼脂平皿、巧克力琼脂平皿、麦康凯平皿和哥伦比亚厌氧血平皿；如果涂片看到真菌样孢子或菌丝，则增加沙保弱琼脂平皿，必要时加玉米和土豆琼脂平皿，置孵箱350C培养。厌氧菌培养经48-72小时培养后，打开厌氧箱，并作耐氧试验，将同一菌落分别置需氧培养18-24小时及置厌氧培养48-72小时。同时作涂片和初步药物敏感试验，将涂片结果电话报告临床医生，此报告为一级报告

5、，并根据科内和微生物电话报告制度进行记录。8小时后报告初步药敏结果为二级报告。9.5转种平皿经18-24小时孵育后，作进一步鉴定和正式药敏试验。不同细菌鉴定参照其相应检查程序进行，做出最终报告。9.6厌氧菌鉴定选择耐氧试验阳性菌株，行厌氧菌鉴定（Vitek2。若系统最终报告为阴性，也应转种厌氧血琼脂证实无菌生长后方可报告阴性结果。推荐厌氧菌血液培养最终报告时间为1周。厌氧菌感染对临床有重要意义应予高度关注，及时与临床联系。9.7若培养瓶在预置时间内未呈现阳性结果，除特殊情况需将瓶内培养液转种血琼脂平皿，一般情况无细菌生长即可报告经XX天培养无细菌生长

6、。榆林市第一医院检验科微生物室程序文件七微生物室临床标本检验中程序02血液标本检验程序文件编号：YLJY-WSW-PF-7-2版本-修改号：1-01生效日期：2014-04-01血液和骨髓9.9血液及骨髓检验流程图增菌培养（需氧及厌氧）Versa-TREK自动血液培养系统指示有菌生长直接药敏试验分离培养涂片、染色、镜检（一级报告）记录35℃4~6小时厌氧培养（贴鉴定和药敏纸片）需氧培养及CO2培养（血琼脂、巧克力琼脂、真菌培养基）初步报告（二级报告）记录观察菌落生化试验（API20A）涂片、染色、镜检、描述涂片、染色、镜检、描述纯培养物最终报告（三级

7、报告）记录VITEK2全自动细菌鉴定/药敏分析系统API、手工鉴定菌显色或YBC鉴定体系最终报告（三级报告）检验医师履行危急值追踪报告制度榆林市第一医院检验科微生物室程序文件七微生物室临床标本检验中程序02血液标本检验程序文件编号：YLJY-WSW-PF-7-2版本-修改号：1-01生效日期：2014-04-019.10各种细菌检测参照其各自检测程序进行。9.11血液培养阳性属微生物危急报告值，检验医师和技师要特别记录加以追踪，如果怀疑污染应立即通知临床再次送检。10.质量控制：Versa-TREK全自动血液培养系统质量控制、VITEK2鉴定系统质量

8、控制、涂片染色质量控制、培养基质量控制、K-B法和MIC药敏试验质量控制、氧化酶试验质控、触酶试验质控，具体