基因工程考试试题

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1、基因工程一名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解。限制酶和甲基转移酶组成限制与修饰系统。2、各种限制与修饰系统的比较Ⅱ型Ⅰ型Ⅲ型识别位点4~6bp，大多为回文序列二分非对称5~7bp非对称切割位点在识别位点中或靠近识别位点无特异性，至少在识别位点外100bp识别位点下游24~26bp简答1.何谓Staractivity？简述Staractivity的

2、影响因素及克服方法？答：在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特征称为星星活性。引起星星活性的的因素：①高甘油浓度（>5%）；②酶过量（>100U/µl）；③低离子强度（<25mmol/L）；④高pH(>8.0)；⑤有机溶剂如DMSO（二甲基亚砜）、乙醇、乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺等；⑥用其它二价阳离子Mn2+、Cu2+、Co2+或Zn2+代替Mg2+。星星活性的抑制措施：①减少酶的用量，避免过量酶切，减少甘油浓度；②保证反应体系中无有机溶剂或乙醇；③提高离子强度到100～150mM（在不抑制酶活性的前提下）；

3、④降低反应pH至7.0；⑤使用Mg2+作为二价阳离子。2.试回答影响限制性内切核酸酶切割效率的因素？（影响酶活性的因素？）答：外因：反应条件、底物纯度（是否有杂质、是否有盐离子和苯酚的污染）、何时加酶、操作是否恰当，反应体系的选择、反应时间的长短内因：星星活性、底物甲基化、底物的构象3、DNA末端长度对酶切割的影响答：限制酶切割DNA时，对识别序列两端的非识别序列有长度要求，也就是说在识别序列两端必须要有一定数量的核苷酸，否则限制酶将难以发挥切割活性。在设计PCR引物时，如果要在末端引入一个酶切位点，为保证能够顺利切割扩增的PCR产物，应在设计

4、的引物末端加上能够满足要求的碱基数目。一般需加3～4个碱基对。4、何为载体？一个理想的载体应具备那些特点？答：将外源DNA或目的基因携带入宿主细胞的工具称为载体。载体应具备：①在宿主细胞内必须能够自主复制（具备复制原点）；②必须具备合适的酶切位点，供外源DNA片段插入，同时不影响其复制；③有一定的选择标记，用于筛选；④其它：有一定的拷贝数，便于制备。5抗性基因（Resistantgene）是目前使用的最广泛的选择标记，常用的抗生素抗性有哪几种？并举两例说明其原理？答：氨苄青霉素抗性基因（ampr）、四环素抗性基因（tetr）、氯霉素抗性基因（C

5、mr）、卡那霉素和新霉素抗性基因（kanr,neor）以及琥珀突变抑制基因supF。⑴青霉素抑制细胞壁肽聚糖的合成，与有关的酶结合，抑制转肽反应并抑制其活性。氨苄青霉素抗性Ampr编码一个酶，可分泌进入细胞的周质区，并催化β-内酰胺环水解，从而解除氨苄青霉素的毒性。⑵四环素与核糖体30S亚基的一种蛋白质结合，从而抑制核糖体的转位。Tetr编码一个由399个氨基酸组成的膜结合蛋白，可阻止四环素进入细胞。6.何为α-互补？如何利用α-互补来筛选插入了外源DNA的重组质粒？答：α-互补指lacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区

6、段的β-半乳糖苷酶阴性的突变体之间实现互补。α-互补是基于在两个不同的缺陷β－半乳糖苷酶之间可实现功能互补而建立的。实现α-互补主要有两部分组成：LacZ△M15，放在F质粒或染色体上，随宿主传代；LacZ'，放在载体上，作为筛选标记，当在LacZ'中插入一个片断后，将不可避免地导致产生无α-互补能力的β－半乳糖苷酶片断。在诱导物IPTG和底物X-gal（同时可作为生色剂）的作用下，含重组质粒的菌落不能产生有活性的β－半乳糖苷酶，不能分解X-gal，呈现白色，而含非重组质粒的菌落则呈现兰色。以此达到筛选的目的。7、试简述λ噬菌体的裂解生长状态L

7、yticgrowth和溶原状态Lysogenicstate两种循环的分化及其调节过程？5答：裂解生长状态是λ噬菌体在宿主中大量复制并组装成子代λ噬菌体颗粒，导致宿主细胞裂解。溶原状态为λ噬菌体基因组DNA通过位点专一性重组整合到宿主染色体DNA中随宿主的繁殖传到子代细胞。调节过程：由感染复数和细胞的营养状态决定的，感染复数越高，营养状态越差，则溶源化的频率就越高。溶源现象的生化媒介可能是3'--5'cAMP，它在细胞内的浓度会随营养条件的变化而改变，当细胞在富营养培养基中生长时，cAMP的浓度较低，有利于裂解生长；在缺乏cAMP的突变细胞中，更

8、有利于裂解生长另外一个重要的调节因素是噬菌体的CⅡ蛋白，它是噬菌体基因转录的激活子，抑制裂解功能基因的表达，催化噬菌体DNA整合到细菌的染色体中去。高