实验五%20培养基的制备、包扎

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1、实验五培养基的制备、包扎一、实验教学目的与要求目的：1、明确培养基的配制原理。2、掌握配制培养基的一般方法和步骤。内容：1、牛肉膏蛋白胨培养基的配制。2、SDAY培养基的配制。二、实验原理培养基是供微生物生长、繁殖和代谢的营养基质。培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子及水分等。培养还应具有适宜的pH、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。在液体培养基中加入0.5%-1.0%的琼脂配置为半固体培养基，加入1%-2%的琼脂配置为固体培养基。琼脂是从石花菜等海藻中提取的多糖，是应用最广的凝固剂。琼脂在96-100℃融化，

2、46℃以下凝固。培养基经灭菌后方可使用。三、实验材料及用具1.试剂牛肉膏、蛋白胨、酵母浸出粉、葡萄糖、琼脂、链霉素、1MNaOH、1MHCl、NaCl、蒸馏水。2.仪器及用具试管、三角瓶、培养皿、烧杯、量筒、玻璃棒、分液漏斗、天平、药匙、pH试纸、称量纸、棉花、纱布、线绳、橡胶管、报纸、铁架台、标签纸。四、操作步骤（一）培养基配方：牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂20g、蒸馏水1L、pH7.0～7.2。SDAY培养基：葡萄糖40g、蛋白胨10g、酵母浸出粉10g、琼脂20g、蒸馏水1L。（二）步骤：操作图示（1）称量按照培养

3、基配方，准确称量各成份放于烧杯中。对于不是粉状（如肉膏），应用烧杯称量。（2）配调向烧杯中加入适量的水，搅拌，使其溶解（可加热助溶）。如是配制固体培养基，在琼脂的熔化时，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。如果配方中含有淀粉，先将淀粉用少量冷水调成糊状并在火上加热搅拌，然后加足水分及其他药品，待完全熔化后补足所失水分。（3）调节pH值培养基溶解均匀并冷却至室温时用pH试纸测pH，然后根据要求加酸或碱（一般用1molHcl和1molNaOH），要缓慢少量且多加搅拌。培养基配方为自然pH时，不用调节。（4）过滤用滤纸或多

4、层纱布过滤，一般无特殊要求可省去。（5）分装将制好的培养基分装入试管内或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。固体培养基要趁热装。分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起污染。分装量可分为下面几方面：a斜面：装量为管长的1/4-1/5。b液体培养基、高层培养基、半固体培养基：装载量不超过管长的1/3。c三角瓶：装量不超过容积1/2。（6）包扎a．培养皿：以旧报纸密密包紧，一般以6套做一包，待灭菌。b．吸管：在距其粗头顶端约0.5cm处，塞一小段1.5cm长的棉花。棉花要塞得松紧恰当（过紧，吹吸液体太费劲；过松，吹气时棉花会下滑），然后分别将每支吸管尖端斜放在旧报纸

5、条的的近左端，与报纸约呈60º角，并将右端多余的报纸打一小结。c．三角玻扒：跟包扎吸管相似，将三角部分斜放在报纸条的近左端，与报纸约呈45º角，并将右端多余的报纸打一小结。（7）灭菌塞棉塞，包扎，灭菌。高压蒸汽灭菌法：是在密闭的加压容器内进行，加热使器内的水产生蒸汽，由于密闭，增加了器内的压力，使水的沸点升高，从而获得高于100度的蒸汽温度。（8）摆斜面灭菌后，如制斜面，则需趁热将试管口端搁在一根长木条上，并调整斜度，使斜面长度不超过试管总长的1/2。（9）无菌检查将灭菌的培养基放入37℃培养箱中培养24-48h，无菌生长即可使用，一次用不完可储存于冰箱

6、内备用。五、注意事项1.在烧杯融化琼脂的过程中，人要在电炉旁看着，以免培养基因沸腾而溢出烧杯。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦。注意带上棉纱手套防止烫伤。2.分装过程中，注意不要使培养基沾在管口上，以免沾污棉塞而引起污染。六、实验结果记录本实验配制培养基的名称、数量，并图解说明其配制过程，指明要点。（作为实验结果）七、问题和思考l．配制培养基有哪几个步骤?在操作过程中应注意些什么问题?为什么?2．培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌?已灭菌的培养基如何进行无菌检查?