培养基的制备、器具包扎和灭菌

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1、实验五培养基的制备、器具包扎和灭菌一、实验目的1、了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。2、了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。3、熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。二、实验原理培养基分类：据组成成分可分为:1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。据用途可分为1.选择培养基：用来从环境中筛选微生物的培养基加富培养基：加入某种微生物生长繁殖所需的

2、营养物质，使其快速生长，便于分离抑制性培养基：加入某种物质抑制其他微生物生长，使目标微生物得到富集，便于分离2.鉴别培养基：用来检测微生物的某些代谢特性，以便鉴别。据培养基的物理状态可分为：1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基或农副产品培养基。3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。配置好的培养基必须立即进行灭菌实验室常用加压蒸汽灭菌法三、实验材料药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶

3、性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O等。高压蒸汽灭菌锅、恒温干热灭菌箱。其它：天平、牛角匙、电磁炉、1NHCl、1NNaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带塞子的无菌试管、培养皿、枪头、枪头盒、标签等。四、实验步骤1、培养基的配制2、分离培养微生物常用器皿的准备3、培养基和玻璃器材的灭菌培养基的配制方法和步骤：1.称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。2.溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。3.调pH值：用NaOH或HCl调pH，用p

4、H试纸对照。4.加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。5.分装。6.包扎，挂上标签（最好用铅笔写），注明何种培养基。7.灭菌备用：培养基灭菌后必须在370C下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（用于分离和培养细菌，是一种天然培养基）牛肉膏3g蛋白胨5g氯化钠5g琼脂20g自来水1000mLpH7.0~7.2灭菌：1.05kg/cm220min马铃薯蔗糖琼脂培养基(用于分离和培养真菌之用，是一种半合成培养基)去皮马铃薯（或鲜豆芽）200g(去皮，切成小块，放水中煮沸，保持20min

5、，用双层纱布过滤取汁)蔗糖20g自来水1000mL琼脂20gpH自然灭菌：（含蔗糖）1.05kg/cm220min高氏一号培养基(用于分离和培养放线菌，是一种合成培养基)可溶性淀粉20.0gKNO31.0gK2HPO40.5gMgSO4•7H2O0.5gNaCl0.5gFeSO4•7H2O0.01gpH7.4~7.6琼脂20g自来水1000mL灭菌：1.05kg/cm230min制备无菌水：无菌水为下一次微生物分离实验中所需要的材料。250mL三角烧瓶（装有玻璃珠），装自来水90mL，试管中装9.0mL自来水，塞上

6、塞子，包扎、灭菌备用。物品的准备：三角烧瓶、试管、培养皿、吸管等的包扎准备。每组配制1种培养基1000ml。包扎平板5包，6个/包；1ml枪头置于枪头盒中，包扎好（用镊子捏取）；1瓶加玻珠无菌水90ml；9ml无菌水试管10根