培养基的制备、器具包扎和灭菌.doc

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1、实验五培养基的制备、器具包扎和灭菌一、实验目的1、了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。2、了解儿种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。3、熟悉分离、培养微生物前的有关准备T作及操作方法。二、实验原理%1培养基分类：据组成成分可分为：1•合成培养基：由备种纯化学物质按一定比例配制而成。2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。据用途可分为1•选择培养基：用来从环境屮筛选微生物的培养基加富培养基：加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质，使其快速生长，便于分离抑制性培养基：加入某种物质抑制其他微生物生长

2、，使li标微生物得到富集，便于分离2.鉴别培养基：用來检测微生物的某些代谢特性，以便鉴别。据培养基的物理状态可分为：1•液体培养基：不加凝問剂的液体状态培养基。2.固体培养基：在液体培养基屮加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基或农副产品培养基。3.半固体培养基：在液体培养基屮加入0.2-0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。%1配置好的培养基必须立即进行灭菌%1实验室常用加压蒸汽灭菌法三、实验材料药品：牛肉膏、蛋白月东、氯化的、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4.KNO3、MgSO4・7H2O、FeSO4*7H20等。高压蒸汽火菌锅、恒温干热火菌箱。其它：天平、牛角匙、电磁炉、1NH

3、C1、INNaOH.pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带塞了的无菌试管、培养血、枪头、枪头盒、标签等。1、培养基的配制2、分离培养微生物常用器皿的准备3、培养基和玻璃器材的灭菌培养基的配制方法和步骤：1•称量：按照配方正确称取乞种原料放于擴瓷杯屮。2.溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。3.调pH值：用NaOH或HC1调pH,用pH试纸对照。2.加琼脂溶化：加热过稈屮要不断搅拌，可适当补水。3.分装。4.包扎，挂上标签（最好用铅笔写），注明何种培养基。5.灭菌备丿山培养基灭菌后必须在370C下恒温培养24h,确定无菌生长，方可使川。牛肉膏蛋白腺琼脂培养基（用于分

4、离和培养细菌，是一种天然培养基）牛肉膏3g5g氯化钠5g琼脂20g白来水lOOOmLpH7.0〜7.2灭菌：1・O5kg/cm22()min马铃薯蔗糖琼脂培养基（用于分离和培养真菌Z用，是一种半合成培养基）去皮马铃薯（或鲜豆芽）200g（去皮，切成小块，放水屮煮沸，保持20min,用双层纱布过滤取汁）蔗糖20g白来水lOOOmL琼脂20gpH自然灭菌：（含蔗糖）1.05kg/cm220min高氏一号培养基（用于分离和培养放线菌，是一种合成培养基）可溶性淀粉20.0gKN03l.OgK2HPO40.5gMgSO4・7H2O0.5gNaCl0.5gFeS04*7H2O0.0lgpH7.4〜7.6琼

5、脂20g自来水lOOOmL灭菌：1.05kg/cm230min制备无菌水：无菌水为下一次微生物分离实验中所需要的材料。250mL三角烧瓶（装有玻璃珠），装自来水90mL,试管屮装9.0mL來水，塞上塞了，包扎、灭菌备用。物品的准备：三角烧瓶、试管、培养1111、吸管等的包扎准备。每组配制1种培养基1000mlo包扎平板5包，6个/包；lml枪头置于枪头盒中，包扎好(用银子捏取);1瓶加玻珠无菌水90ml；9ml无菌水试管1()根