Vc含量测定

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1、方法一、2.6－二氯酚靛酚滴定法二、原理　　　Vc又称抗坏血酸，还原型抗坏血酸能还原染料2.6－二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。在酸性溶液中，2.6－二氯酚靛酚钠离子呈红色，被还原后变为无色。三、实验器材锥形瓶、微量滴定管、研钵、容量瓶、吸量管等。四、实验试剂　2%草酸溶液：取2g草酸溶于100ml蒸馏水中。1%草酸溶液：取1g草酸溶于100ml蒸馏水中。标准抗坏血酸溶液（0.1mg/ml）：精确称取10mg抗坏血酸，以1%草酸溶解并定容到100ml。储存到棕色玻璃瓶中，最好临用前配制。0.001N

2、2.6－二氯酚靛酚钠溶液：将50mg2.6－二氯酚靛酚钠溶解于约200ml含有52mgNaHCO3的热蒸馏水中，冷却后定容到250ml，储存在棕色瓶中，保存在低温下。2.6－二氯酚靛酚钠不稳定，必须在一周内用完。用前必须标定到1ml2.6－二氯酚靛酚钠相当于0.088mg抗坏血酸。五、操作　1、植物样品Vc提取液的制备：用电子天平准确地称取辣椒0.5g，样品必须预先用温水洗去泥土，并在空气中风干，加25ml2%草酸溶液匀浆，并将匀浆液转入50ml离心管中；用少量2%草酸溶液冲洗匀浆杯，一起转入离心管中进行离心

3、（5min,4500rp），将上清液移入50ml容量瓶，用少量2%草酸冲洗沉淀并离心保留上清，如此反复抽提3次，最后用2%草酸定容到50ml。2、测定：每次量取5ml提取液放入小锥形瓶内进行滴定。用微量滴定管以2.6－二氯酚靛酚钠溶液滴定到提取液呈现淡粉红色，并在15～30秒内不褪色，滴定过程必须迅速，不要超过2分钟。另取5ml2%草酸作空白对照进行滴定。平行进行2-3次，计算样品中Vc含量。M=[(VA-VB)×C×0.088×100]/（D×W）M：100g样品中含抗坏血酸的质量mg　　VA：滴定样品管时

4、所用去染料体积数　mlVB：滴定空白管时所用去染料体积数ml　C：提取液总体积mlD：滴定时所取的样品的提取液毫升数　　W：被检样品的重量0.088：0.001N2.6－二氯酚靛酚钠溶液1ml相当于0.088mgVc方法二、紫外快速测定法（张波老师说用这个方法做实验）一、原理：Vc的2.6—二氯酚靛酚容量法，操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响。紫外快速测定法，是根据Vc具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于243nm处测定样品液与碱处理样品液两者消光值之差，通过查标准曲线，即

5、可计算样品中Vc的含量。二、实验器材：紫外分光光度计、离心机、分析天平、容量瓶（10ml,25ml）、移液管（0.5ml，1.0ml）、吸管、研钵。 三、实验试剂：10%HCl：取浓盐酸133ml，加水稀释至500ml。1%HCl：取浓盐酸22ml，加水稀释至100ml。1MNaOH溶液：称取40gNaOH，加蒸馏水，不断搅拌至溶解，然后定容至1000ml。四、操作步骤：（一）标准曲线的制作1．抗坏血酸标准溶液的配制：用分析天平准确称取抗坏血酸10mg，加2ml10%盐酸，加蒸馏水定容至100ml，混匀。此抗

6、坏血酸溶液的浓度为100μg/ml。2．取带塞刻度试管8支并编号，分别按表内所规定的量加入抗坏血酸标准溶液和蒸馏水。  12345678标准抗坏血酸溶液加入体积（ml）0.10.20.30.40.50.60.81.0蒸馏水加入体积（ml）9.99.89.79.69.59.49.29.0总体积（ml）10.010.010.010.010.010.010.010.0抗坏血酸溶液浓度（μg/ml）1.02.03.04.05.06.08.010.0  3．消光值的测定：以蒸馏水为空的，在243nm处测定标准系列抗坏血

7、酸溶液的消光值，以抗坏血酸的含量（μg）为横坐标，以相应的消光值为纵坐标作标准曲线。（二）样品的测定1．样品的提取：将果蔬样品洗净、擦干、切碎、混匀。称取5.00g于研体中，加入2-5ml1%HCl，匀浆，转移到25ml容量瓶中，稀释至刻度。若提取液澄清透明，则可直接取样测定，若有浑浊现象，可通过离心（10000g,10min）来消除。2．样品的测定：取0.2ml提取液，放入盛有0.4ml10%HCl的10ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。以蒸馏水为空白，在243nm处测定其消光值。3．待测碱处理液的制

8、备：分别吸取0.2ml提取液，2ml蒸馏水和0.8ml1MNaOH溶液依次放入10ml容量瓶中，混匀，15min后加入0.8ml10%HCl，混匀，并定容至刻度。以蒸馏水为空白。在243nm处测定其OD值。4．由待测样品与待测碱处理样品的消光值之差和标准曲线，即可计算出样品中Vc的含量。5．也可直接以待测碱处理液为空白，测出待测液的消光值，通过查标准曲线，计算出样品的Vc的含量。 四、计算