公共场所微生物检验作业指导书02_05

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1、.作业指导书编号：ZQCDC/ZY02第1页共1页公共场所毛巾、床上卧具微生物检验方法大肠菌群测定操作规程第1次修订实施日期：2011年5月1日1、目的依据GB/T18204.2—2000公共场所茶具微生物检验方法大肠菌群测定，熟练掌握此规程，保证检验结果的准确性。2、适用范围本标准规定了公共场所公用毛巾、床上卧具大肠菌群的测定方法。3、责任使操作者熟悉此规程，并在具体样品检验中严格遵照操作，确保检测结果准确性。4、内容：4.1定义：大肠菌群指一群在37℃、24h能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌痒的革兰氏阴性无芽

2、胞杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以次作为粪便污染指标来评价公用毛巾、床上卧具的卫生质量。4.2仪器：见GB/T18204.3—2000中第3章。4.3培养基和试剂：见GB/T18204.3—2000中第4章。4.4检验程序：见GB/T18204.3—2000中第5章。4.5操作步骤4.5.1采样方法4.5.1.1随机法：随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾、床上卧具。4.5.1.2涂抹法：用测定细菌总数时采集的样品，无需重采。4.5.1.3纸片法：用灭菌生理盐水湿润5cm×5cm大肠菌群快速测定纸片两张，分别贴在毛巾、

3、床上卧具规定部位和面积范围内，约30s后取下，置于无菌塑料袋内。4.5.2检验方法4.5.2.1发酵法4.5.2.1.1用测定细菌总数剩余的检样，倒入双料乳糖胆盐发酵培养液中。置36℃±1℃培养箱内培养24h。4.5.2.1.2观察是否产算、产气，若有变黄和气体产生，该管推测是检验阳性。如不产酸、产气则为大肠菌群阴性。4.5.2.1.3自推测性检验阳性管中取一接种环培养液，转种伊红美蓝琼脂平板上，置36℃±1℃培养箱培养18～24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实性试验。4.5.2.1.4在上述平板上，

4、挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行染色镜检；同时接种乳糖发酵管，只36℃±1℃培养24h。4.5.3纸片法将已采样的纸片置36℃±1℃培养箱内培养16～18h，观察结果。4.6结果报告见GB/T18204.3—2000中第7章。...作业指导书编号：ZQCDC/ZY03第1页共2页公共场所浴盆、脸（脚）盆微生物检验方法细菌总数测定操作规程第1次修订实施日期：2011年5月1日1、目的：公共场所浴盆、脸（脚）盆微生物检验方法细菌总数测定。2、适用范围：本标准适用于公共场所浴盆、脸（脚）盆细菌总数的测定。3、责任：使操作者

5、熟悉本规程，并在具体样品检验中严格遵照操作，确保检测结果准确性。4、内容4.1定义细菌总数：指公共场所浴盆、脸（脚）盆经过采样处理，在一定条件下培养后（培养基成分、培养温度、培养时间、PH值、需氧性质等），25cm2表面上含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。细菌总数可作为判定公共场所浴盆、脸（脚）盆被污染程度的标志，也可以为公共场所浴盆、脸（脚）盆消毒效果的判定和评价提供依据。4.2仪器见GB/T18204.1—2000中第四章4.3培养基和试剂4.3.

6、1营养琼脂培养基见GB/T18204.1—2000中4.14.3.2无菌生理盐水：分装125mL瓶供浴盆采样，50mL瓶供脸（脚）盆采样。　4.4采样　4.4.1采样必须在无菌操作下进行，采样用具应高压灭菌121℃20分钟。　4.4.2采样部位，选择在盆内侧壁二分之一至三分之一高度采样。　4.4.3采样布点，浴盆可在四壁及盆底呈梅花布点，脸（脚）盆可在相对两侧壁布点。　4.4.4采样方法4.4.4.1涂抹法：用侵有无菌生理盐水的棉拭子在规格板（5cm×5cm）内来回均匀涂满整个方格，并随之转动棉试子，剪去手接触部位后

7、，将涂抹浴盆的5个棉试子一并放入125mL生理盐水烧瓶中，涂抹脸（脚）盆的2个棉试子一并放入50ｍＬ生理盐水三角烧瓶中，充分振摇或在旋涡振荡器上振荡1　分钟，每毫升的菌浓度相当于1平方厘米的菌量。4.4.4.2斑贴法：将5cm×5cm无菌滤纸片放入灭菌平皿中，注入灭菌生理盐水1mL片（吸满为止），以无菌操作将滤纸片贴到采样部位，1分钟后按序取下，将贴浴盆的5片滤纸一并放入125,mL生理盐1分钟，每毫升的菌尝试相当于1平方厘米的菌量。4.5检验方法4.5.1用1mL灭菌吸管吸取样品1mL,加到灭菌平皿内，同样再吸1m

8、L加到...作业指导书编号：ZQCDC/ZY03第2页共2页公共场所浴盆、脸（脚）盆微生物检验方法细菌总数测定操作规程第1次修订实施日期：2011年5月1日一平皿内。　4.5.2如污染严重，可作10倍递增稀释，每递增稀释一次，换一支无菌吸客，每个稀释度接种两个平皿。　4.5.3稀释液移入平皿后，应及时将冷却至46℃的营养琼脂培养基（可放置46℃