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《荧光物质稀溶液的激发、发射和同步荧光光谱测定实验报告》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、实验一荧光物质稀溶液的激发、发射和同步荧光光谱测定一.实验目的1•学习荧光分析法的基木原理和LS-55B发光分析仪的操作。2.学习同步荧光的操作，了解同步荧光的优点。二.实验原理荧光是分子从激发态的最低振动能级回到原来基态时发射的光。利用物质被光照射后产生的荧光辐射对该物质进行定性分析和定量分析的方法，称为荧光分析。在一定光源强度下，若保持激发波长不变，扫描得到的荧光强度与发射波长/U的关系曲线，称为荧光发射光谱；反之，保持/U不变，扫描得到的荧光强度与/U的关系曲线，则称为荧光激发光谱。在一定条件下，荧光
2、强度与物质浓度成正比，这是荧光定量分析的基础。荧光分析的灵敏度不仅与溶液的浓度有关，而且与紫外光照射强度及所选测量波长等因素有关。苯酚由于其共轨结构，有荧光活性，可以用荧光分析法测定。它们的激发光谱和发射光谱有互相重叠的现象。对于复杂组分，当激发光谱和发射光谱有互相重叠的现象时，可以用同步荧光扫描，同步扫描荧光光谱技术可以简化、窄化光谱，提高选择性。三.实验仪器和试剂1.LS-55型发光谱仪；2.移液枪(德国BRAND公司生产)；3.50ml容量瓶，25ml容量瓶10支；4.苯酚储备液：960mg/L5.去
3、离子水；四.实验内容1•预扫描(prc-scan)用储备液配制浓度为lOppm(mol/L)的工作液，设定仪器参数，进行全波长预扫描，并记录扫描结果，得岀最大激发和发射波长，同吋查看其瑞利散射波长、以及双倍频峰波长。2.激发光谱、发射光谱和同步荧光扫描①设定合适的参数，分别对苯酚溶液进行荧光激发、发射和同步荧光光谱扫描。②取浓度为0.010(mol/L)的工作液，扫描发射光谱，加水稀释后再在同样波长下扫描发射光谱，观察荧光猝灭效应。发射光谱参数：扫描波长范围200一750nm；Ex=214nm>270nm,
4、扫描速度=1000nm/min,Ex-Slit=10nm,Em-slit=5nm,,记住取文件名。激发光谱参数：扫描波长范围200-750nm,/U=300nm、586nm,扫描速度=1000nm/min,Ex-Slit=10nm,Em-slit=5nm,记录信息。同步荧光光谱：扫描波长范围250-750nm,从(九"・九)=30门1?1、86niTi,扫描速度=1000nm/min,Ex-Slit=10nm,Em-slit=5nm,记录信息。3.三维荧光光谱扫描设定发射波长范围，激发开始波长，步长，测定数
5、目，开始进行苯酚三维荧光光谱扫描。一.数据处理1.用实验获得的数据绘制苯酚的激发、发射、同步光谱。答：发射光谱EX二214nm2004C0600系系系係列1波长214nm系列2波长212nm系列3波长2l6nm)发射光谱Em=270nm123列列列系系系係列1波长270nm系列2波长268nm系列3波长272nm)激发光谱Em=300nm係列1波长300nm系列2波长298nm系列3波长302nm)激发光盘Ex=586nm123列列列系系系(系列1波长586nm系列2波长584nm系列3波长588nm)同步
6、光谱△入=30nm、86nm扫觥围—系列1—系列2(系列1波长30nm系列2波长86nm)1.对比不同浓度下的苯酚的最大激发波长和最大发射波长处的峰高，了解荧光猝灭效应。取浓度为0.01(mol/L)的苯酚溶液，固定激发光的波长为270nm,狭缝宽度为lO.Onm,发射光的狭缝宽度为5.0nm,扫描波长范围250—750nm,扫速为1000nm/min,扫描荧光强度与发射光波长的关系曲线，所得曲线如下：NM图7将溶液稀释后再以同样的条件扫描荧光强度与发射光波长的关系曲线，所得曲线如下：1015.1从图7与图
7、8（图8中红色线是稀释前的曲线，蓝色线是稀释后的曲线）上可明显看出稀释后的峰的强度大了许多，这是由于在高浓度时一部分苯酚的发射光被自身吸收了，发生了荧光的猝灭，而浓度低时这种自身吸就大大减少，峰的强度反而变大。所以，荧光分析的浓度不能高。1.用MATLAB绘制三维荧光光谱。・D
8、x
9、團3DViev-3DDt0d.SP3EditKievHelp717680660640620600580560540520500480460440420400380360340320300280260240220200180160
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