实验一荧光物质稀溶液的激发

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1、实验一荧光物质稀溶液的激发、发射和同步荧光光谱测定—.实验目的1.学习荧光分析法的基本原理和LS-55B发光分析仪的操作。2.学习同步荧光的操作，了解同步荧光的优点。二.实验原理荧光是分子从激发态的最低振动能级回到原來基态吋发射的光。利用物质被光照射后产生的荧光辐射对该物质进行定性分析和定量分析的方法，称为荧光分析。在一定光源强度下，若保持激发波长不变，扫描得到的荧光强度与发射波长九川的关系曲线，称为荧光发射光谱；反之，保持九，”不变，扫描得到的荧光强度与入%的关系曲线，则称为荧光激发光谱。在一定条件下，荧光强度与物质浓度成正比，这是荧光定量分析的基础。荧光分析

2、的灵敬度不仅与溶液的浓度冇关，而且与紫外光照射强度及所选测量波长等因索冇关。苯酚由于其共辘结构，有荧光活性，可以用荧光分析法测定。它们的激发光谱和发射光谱有互相重叠的现象。对于复杂组分，当激发光谱和发射光谱有互相重叠的现象时，可以用同步荧光扫描，同步扫描荧光光谱技术可以简化、窄化光谱，捉高选择性。川于测母荧光/磷光/发光的LS45/55是由图3所示的五个主耍部件组成的:光源、激发光单色器、样品池、发光单色器及检测器.出光源发出的光经激发光巾色器得到所需要的激发光波长。如其强度为I。，通过样品池后，由于一部分光能被荧光物质吸收，其透射光强度减为T.3荧光物质被激发

3、后，将发射荧光。为了消除入射光和散射光的影响,荧光的测量通常在与激发光成直角的方向进行。为了消除川能共存的英他光纤的干扰，如由激发光所产生的反射光、瑞利散射光和越曼光.以及为将溶液中的杂质所发生的荧光滤去，以获得所需要的荧光.在样品池和检测器Z间设置了发光单色器.荧光作用于检测器上，得到了相应的电信号，经放大后再记录下来。(1)激发光源：在紫外一可见区范围内.氤灯故为常川，而又分连续和脉冲氤灯。LS45/55采用的是脉冲氤灯。二者比较如下：脉冲氤灯与连续鼠灯的比较脉冲鼠灯与连续毎灯的比较脉冲寵灯连续鼠灯1功耗8.3瓦（5OW）150瓦2灯的种类低压灯，寿命长高压

4、灯.工作温度时达40~50人气圧3电源供应简单.轻便复杂、笨重4工作时产生臭氧量很少、低于NC&4你准很多5产生热贲情况很少很多、工作时温升达300-450C6预热时间不需长时间预热，不测定时可关闭需长时间预热、可达45分钟7启动时是否需要高压脉冲不需要必须有8是否有光解作用每20呈秒中仅有10微秒的强光照射、不测宦时可关闭・大大减少光解作用样品受连续强光照射,产生光解作用9对暗迫流的处理方式每_脉冲间测定暗电流•増进低荧光呈的测定要用遮光拆或切光益來测定暗吐流10测定璘光的条件用软件控制即可测定磷光.不需附件需要磷光附件才能测定11测定隣光的效果磷朮的灵緻度不

5、损失，脉冲率、延迟时间及门限时间均可变更W光的灵敬度因使用附件而有损失.延迟时间又受附件转速限制12光源能量输出量相当于20删50吃）仅［50W所以采用脉冲毎灯的LS45/55不需附件，可直接测定荧光、磷光及发光。（2）样品池:荧光用的样品池需用低荧光的材料制成,通常用石英,形状以方形和长方形为宜°（3）激发单色器：用于选择激发波长。（4）发射单色器：用于分离岀荧光/磷光/发光的发射波长。（5）检测器：荧光的强度通常比较弱，因此应采用具右较高灵敏度的光电倍増管，并与激发光成直角。LS45/LS55的标准检测器检测卜•限为650nm,若要测到900nm则应选择红敏

6、倍增管.二.实验仪器和试剂1.LS-55型发光谱仪；2.移液枪（德国BRAND公司生产）；3.50ml容量瓶，25ml容量瓶10支；4.苯酚储备液：960mg/L5.去离子水；四、实验内容(二)扫描(Scan)菜单的应用1、扫描的三种方式1.1预扫描：以便找出未知样品的最适宜激发波长；1・2单个单色器扫描：可单独进行激发光或发射光的光谱扫描；1・3同步扫描：两个单色器以一定的波长间距同步转动进行扫描；匚2.预扫描2・1激发光单色器预扫描(发射光单色器怖I定在某波长)2.2发射光单色器预扫描(激发光小色器固定在某波氏)2•3激发/发射预扫描(鬥动顺序进行上述阿种预

7、扫描)1.预扫描(pre-scan)用储备液配制浓度为lOppm(mol/L)的工作液，设定仪器参数，进行全波长预扫描，并记录扫描结果,得出最大激发和发射波长，同吋查看其瑞利散射波长、以及双倍频峰波长。2•激发光谱、发射光谱和同步荧光扫描①设定合适的参数，分别对苯酚溶液进行荧光激发、发射和同步荧光光谱扫描。②取浓度为0.010(mol/L)的工作液，扫描发射光谱，加水稀释后再在同样波长下扫描发射光谱，观察荧光猝灭效应。发射光谱参数：扫描波长范围200一750nm；Ex=214nm、270nm,扫描速度=1000nm/min,Ex-Slit=10nm,Em-sli

8、t=5nm,,记住取文件