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1、胰腺实性假乳头状肿瘤的无标记双光子激发荧光成像【摘要】胰腺实性假乳头状肿瘤（SPT）是一种恶性较低的分泌性上皮肿瘤，此类肿瘤在胰腺肿瘤中较为罕见但在年轻女性中的发病率较高，根据世界卫生组织的研究，将该疾病命名为胰腺实性假乳头状肿瘤，患者通常表现为非特异性的临床症状，最常见的症状有腹部疼痛、腹部肿块，恶心等，少数患者还会出现包括黄疸、贫血、胃肠道梗阻和胰腺炎等症状。目前，胰腺SPT诊断的国际标准主要依据的是病理学或细胞学，诊断的主要方法是通过苏木精、伊红染色剂对待测细胞进行染色,利用染色剂的特性突显出待测细胞的病理学或细胞学特征，之后利用传统光学显微镜观察其结构特征，从而达到诊断的目的。但
2、是，由于传统的染色法十分依赖染色剂的使用，在染色的过程中不仅时间长速度慢，而且染色剂的用量和染色时间也不好控制，因而容易造成染色不当引起的误诊。本文介绍了一种新型的光学诊断技术，可以很好地在弥补传统染色法缺点的同时提高诊断的准确度。具体方法是：利用双光子激发荧光（TPEF）显微镜在无需苏木精、伊红(H&E)染色的前提下对人体正常胰腺组织和SPT组织的切片进行荧光成像，确定它们的组织结构、细胞形态以及细胞质的变化。我们的研究结果显示：所获得的正常胰腺组织的高分辨率TPEF图像可以较完整地显示出细胞的形态与结构，而胰腺SPT的高分辨率TPEF图像可以清晰地显示出其病理结构的特征。此外，基于T
3、PEF图像，我们还计算了胰腺SPT组织和正常胰腺组织的核质比，来定量描述他们在形态学上的差异。以上的研究结果表明：利用双光子激发荧光成像技术能够对胰腺组织切片进行无标记成像，与传统的染色法成像相比，不仅可以节省大量时间，而且还能提高诊断的准确率,是一种优于传统诊断方法的新型光学诊断方法。【关键词】双光子激发荧光成像；光学诊断；胰腺实性假乳头状肿瘤；未染色组织切片9目录1.引言……………………………………………………………………………………………………………42.材料与方法……………………………………………………………………………………………………52.1样品制备…………………………………
4、……………………………………………………………52.2荧光显微镜检测………………………………………………………………………………………52.3定量方法………………………………………………………………………………………………53.实验结果………………………………………………………………………………………………………63.1正常胰腺组织的TPEF显微成像………………………………………………………………………63.2胰腺SPT组织的TPEF显微成像………………………………………………………………………63.3对正常胰腺和胰腺SPT的定量分析…………………………………………………………………84
5、.讨论……………………………………………………………………………………………………………85.结论……………………………………………………………………………………………………………86.致谢……………………………………………………………………………………………………………9参考文献………………………………………………………………………………………………………991.绪论胰腺实性假乳头状肿瘤是一种分布于外分泌胰腺细胞中的低度恶性肿瘤[[]LeeJH,YuJS,KimH,etal.Solidpseudopapillarycarcinomaofthepancreas:differentiati
6、onfrombenignsolidpseudopapillarytumourusingCTandMRI[J].ClinRadiol,2008,63:1006–1014.]，发病人群主要集中于年轻女性，它由Frantz在20世纪50年代首次发现，并依照此类肿瘤的组织学特征，将该肿瘤命名为囊性-实性-乳头状上皮性肿瘤[[]陈东,史雪琴,薛德斌.胰腺实性假乳头状肿瘤临床病理学及免疫组化研究[J].ModernPracticalMedicine,2015,27(10):1671-0800.]。按照2000年世界卫生组织（WHO）的分类，胰腺SPT通常被定义为由围绕在毛细血管周围的单细胞组成的上皮
7、性肿瘤，其形态表现为坚实的团块以及假乳头状的组织结构，并伴随着出血和囊性变性[[]ColemanKM,DohertyMC,BiglerSA.Solid-pseudopapillarytumorofthepancreas[J].Radiographics,2003,23:1644–1648.,][[]WangWB,ZhangTP,SunMQ,etal.Solidpseudopapillarytumorofthepancreaswith
