小鼠衰老检测

《小鼠衰老检测》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、小鼠全体实验记录1，全身拍照衰老治疗正常组正常组衰老治疗组2，全身称重寿命1.对平均寿命（meanlifespan）/最大寿命（maximumlifespan）的影响二、衰老性心脏肥大1.心室中部横截面染色，观察截面大小情况，年轻小鼠较小，老年小鼠肥大。1.心脏重量/胫骨长度（mg/mm），表征肥大状况，数值越大，衰老程度越高。（选择原因：胫骨长度在小鼠发育成熟后不再有变化，可作为量化对比标准）2.左心室（leftventricle，LVs）PAS染色（过碘酸雪夫染色，periodicacidSchiffstain），观察细胞横截面积大小。（心脏肥大是因为细胞个体

2、变大还是细胞数量变多）3.心肌细胞（cardiomyocyte，CM）横截面积（crosssectionalarea，CSA）测定。雌雄分组，每个动物选5个独立切片，结果根据平均值计算，测量方法：选取一定面积区域，数区域内细胞数量，计算出心肌细胞横截面积。5.小鼠心脏部位取材，RT-PCR测量心房利尿钠肽（atrialnatriureticpeptide，ANP）,脑钠素（brainnatriureticpeptide，BNP）,肌浆网钙ATP酶（sarcoplasmicreticulumcalciumATPase，SERCA-2）的表达量。6.Western测生

3、长分化因子11（growthdifferentiationfactor11，GDF11）在血浆的水平。老年小鼠少，年轻小鼠多。三、认知功能1.Morris水迷宫实验（Morriswatermaze，MWM）。学习逆转阶段评估短期学习记忆能力、探索阶段评估长期记忆、对象偏好评估识别记忆、对新伙伴的认可能力。2.海马裂解物中，免疫印迹定量突触蛋白I（synapsinI）、突触素（synaptophysin）、突触后密度蛋白（postsynapticdensityprotein95，PSD95）。3.测定整个海马的基因表达谱，2090个可变表达基因分层聚类。156个最上

4、调和76个最下调的转录物进行基因本体富集分析的网络可视化。4.RT-PCR评估Klotho（KI）甲状腺素转运蛋白（transthyretin，Ttr）、Bdnf5.来自海马裂解物的免疫印迹定量分析，包括CREB/ERK/Akt的磷酸化和总cAMP，组蛋白H3,H4，H2A。四．生殖能力1.足月妊娠成功的比例/数量（雌性小鼠）2.后代存活数量3.卵巢部位切片，对EGFP表达免疫分析。五．骨质疏松1.小鼠BMSCs中衰老标记物53BP1和c-H2AX的表达。表达量大表示干细胞衰老。2.左图是小鼠胫骨三维（3D）图像，中间图像是X射线图像，右图像小鼠胫骨样本的3Dmi

5、cro-CT重建图像，计算骨体积分数BV/TV六．其他1.衰老抑制剂加入后21天，测定SA-β-半乳糖苷酶活性，活性降低，表示抗衰老效果好2.加入后21天，测定细胞增殖量（与对照组比较），细胞增殖量多，抗衰老效果好3.降低ATM磷酸化水平，以及其下游目标p-CHK2,p-p53,和p21。衰老相关的p16marker也在治疗后下降1.流式细胞仪测定线粒体膜电位（与年轻小鼠对照）2.氧消耗量（OCR）（与年轻小鼠对照）3.细胞外酸化速率（ECAR）（与年轻小鼠对照）4.糖酵解/氧化磷酸化ATP的生成量（与年轻小鼠对照）5.对活性氧ROS监测，其中DHR123对羟基自

6、由基、过氧化氢染色，MitoSOX对超氧阴离子染色6.细胞核形态观察（与年轻小鼠对照）1.肝、脑组织中单胺氧化酶MAO-B活性，活性越低越年轻。2.全血谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px活性和心肌脂褐素含量，GSH-Px活性高年轻，心肌脂褐素含量低年轻。3.皮肤中羟脯氨酸Hyp的含量，含量越高越年轻。窗体底端13.各组织、脏器（皮肤，心肝脾肺肾脑等）中脂质过氧化物MDA（丙二醛）的含量，含量低年轻，超氧化物歧化酶SOD活性，活性越高越年轻。参考文献：LoffredoFS,SteinhauserML,JaySM,etal.GrowthDifferentiationFac

7、tor11isaCirculatingFactorthatReversesAge-RelatedCardiacHypertrophy[J].Cell,2013,153(4):828-39.BilkeigorzoA,AlbayramO,DraffehnA,etal.AchroniclowdoseofΔ9-tetrahydrocannabinol(THC)restorescognitivefunctioninoldmice.[J].NatureMedicine,2017.SelesniemiK,LeeHJ,NiikuraT,etal.Youngadultdonorbo

8、nemar