指导原则大纲

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1、£S1GPH2■1编号:疫苗生产用细胞基质的技术审评一般原则药品审评中心二五年十二月一、概述3二、细胞基质的分类4三、细胞基质存在的潜在危险性6四、细胞基质的一般技术要求和评价8五、新细胞系/株的技术要求13六、参考文献14七、起草说明15八、著者17%1.概述生产用细胞基质是指培养病毒时所需要的细胞，是生产病毒疫苗必不可少的原材料。任何微生物的生长、繁殖都有各自的最基本的条件，病毒的生长和繁殖必须在细胞内进行。病毒疫苗是以培养、收获足够量的病毒为基础。目前培养病毒的方法主要有二种，一种是通过病毒的细胞培养得到病毒，另一

2、种是采用病毒感染动物（包括鸡胚）获得病毒。生物制品的质量控制不仅仅是对终产品的质量控制，而是对整个生产过程的质量控制，包括原材料、中间产品、终产品以及生产过程的质控等等。细胞基质作为主要原材料，其质量的优劣，直接影响疫苗的质量和产量，尤其是疫苗的安全性。一般认为，用细胞基质生产疫苗，主要关注的质量问题在于可能存在的外源因子污染和某些情况下细胞本身的特性，以及细胞培养中各个环节的操作，因此，只有妥善解决上述问题，才能达到对疫苗的质量控制。本原则主要阐述细胞基质的分类、各类细胞基质的优缺点、力求从科学的角度分析和认识潜在的危

3、险性，以及科学客观评价细胞基质安全性和有效性常用的方法等等。本原则仅为一般性技术要求和原则，非强制性。希望能够有助于疫苗类制品的审评工作，同时促进药品审评机构与疫苗生产企业、疫苗研制者之间的交流。此外，希望本原则对疫苗研制开发工作有所启示。%1.细胞基质的分类本原则将细胞基质分为三类，即原代细胞、二倍体细胞和传代细胞。（T＞原代细胞原代细胞是指直接来源于动物组织的细胞，动物组织经胰酶消化培养成单批注IA1J:批注IA2]:层细胞（通常贴壁生长），用于病毒的培养。如地鼠肾细胞、猴肾细胞、兔肾细胞、鸡胚细胞等。原代细胞在疫苗

4、的生产中已使用了40多年，证明是安全有效的。我国已上市的疫苗中，乙型脑炎疫苗、肾综合征出血热疫苗、狂犬病疫苗使用地鼠肾细胞，麻疹、腮腺炎疫苗使用鸡胚细胞，风疹疫苗使用兔肾细胞,脊髓灰质炎疫苗使用猴肾细胞原代细胞具备的优点有：使用的细胞培养液相对简单，很多病毒都可以在原代细胞上生长繁殖，具有广泛的敏感性；原代细胞的来源比较容易，尤其是地鼠，是哺乳动物中繁殖最快的动物之一；由于原代细胞属正常细胞，没有DNA突变，无致肿瘤性。原代细胞的缺点包括：存在潜在的病毒等外源因子污染问题；来自不同个体动物的细胞质量和敏感性有差异。鉴于原

5、代细胞的上述缺点，生产减毒活疫苗的动物应尽可能达到SPF级，至少不应低于清洁级；生产灭活疫苗的动物应尽可能达到清洁级以上，至少应采用健康动物；采用等级动物的原代细胞或传代细胞以及二倍体细胞是将来生产灭活疫苗的发展方向。（-X传代细胞传代细胞是可在体外连续传代的细胞系，理论上具有无限传代的寿命。传代细胞系可以通过以下方法衍生而来，（1）人或动物肿瘤细胞的原代细胞的系列培养，例如Hela细胞、Namalva细胞等；（2）携带致癌基因的病毒，将致癌基因转化给正常细胞，成为肿瘤细胞，例如EB病毒转化的B淋巴细胞；（3）骨髓瘤细胞

6、与B淋巴细胞融合，例如生产单克隆抗体的杂交瘤细胞株；（4）正常细胞群的连续传代，繁衍成一个新的具有无限寿命的细胞群，例如非洲绿猴肾细胞的传代细胞系Vero细胞、幼仔地鼠肾的传代细胞系BHK21细胞、中华仓鼠卵巢细胞的传代细胞系（CHO细胞）等。目前尚无用于疫苗生产的来源于人类组织的传代细胞系。由于肿瘤细胞或携带肿瘤基因的细胞具有致肿瘤的危险，所以该类细胞不能作为细胞基质用于疫苗生产；因此用于病毒组织培养的细胞系采用非肿瘤细胞系，即正常细胞群的连续传代后繁衍的细胞系，在一定传代限度内使用，使用最多的是Vero细胞。例如，人

7、用狂犬病纯化疫苗、脊髓灰质炎灭活（纯化）、肾综合征出血热纯化疫苗、乙型脑炎纯化疫苗均已使用Vero细胞生产。传代细胞具备的优点包括：能够充分鉴定和标准化；使用细胞种子库系统生产，有利于质量控制；可用于微载体生物反应器，可大规模生产；对培养基及牛血清的营养成份要求不高。传代细胞的缺点有，理论上有致肿瘤性的危险，但WHO认为Vero细胞在150代以内使用是安全的，无致肿瘤性。（三）、人二倍体细胞人二倍体细胞是采用人源细胞（通常为胚胎组织）建立的细胞株，可进行体外传代培养，但具有一定的传代寿命，超过一定代次，细胞衰老，如2BS

8、细胞、KMB-17、MRC-5细胞等。上述细胞系在疫苗的生产中使用了30多年，证明是安全有效的，无致肿瘤性。我国已上市的疫苗中，甲型肝炎疫苗、脊髓灰质炎疫苗、风疹减毒活疫苗、水痘减毒活疫苗分别使用了2BS、KMB-17、MRC-5细胞。二倍体细胞与原代细胞相比，具有能够充分鉴定和标准化的优点，可实现细胞种子库系统，建