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1、脱无机硫种的筛选及鉴定优良的脱硫菌种是微生物脱硫技术的基础和关键，菌种的筛选结果总接影响到脱硫菌种的适用性及脱硫能力的强弱。理想的工业菌种应符合以下要求:(1)遗产性状稳泄：(2)生长速度快，不易被噬菌体等异种微生物污染：(3)11标产物的产量尽可能接近理论转化率：(4)
2、=
3、标产物/好能分泌到胞外.以降低产物抑制并利于产物分离；(5)培养基成分简单、来源广、价格低廉。新的菌种需要从"然生态环境中混杂的微牛物群中挑选出來，因此必须要冇快速而准确的新菌种分离和筛选方法。7.1实验样品及培养基7.1.1菌株来源本实验所要筛选的能够代谢硫元素的菌株分布极为广泛，如温泉、火山口、地热地区及深
4、海海底和碱湖等一些极端环境，还有汕出水中及其他工业水系统和动物肠内都有代谢硫元素的菌株被发现。为确保筛选到具有较髙脱硫活性的菌株，分别在不同的地点和不同环境条件下采集了女种样胡。采集的样晶分別为上样、水样、矿石样，先后数次采集不同类型的样品19份。(1)大同煤矿上样1份：(2)大同煤矿矿井水样1份：(3)朔州煤矿上样1份：(4)内蒙古红骏9化吧厂污泥1份；(5)内蒙古红骏马化肥厂水样2份；(6)内蒙古东升庙硫铁矿上样2份；(7)内蒙古东升庙硫铁矿矿井水样2份：⑻内蒙古炭窑口硫铁矿土样2份:⑼内蒙古炭窑口硫铁矿矿井水样1份:(1。)黑龙江五大连池火山口附近石样2份；(11)黑龙江五大连
5、池火山口附近上样2份；(12)黑龙江五大连池火山锥上样2份。7.1.2培养基实验过程中使用9K培养基组成(g/L)：(NH4)2SO43.0,KC10.1,K2HPO4-3H2O0.655,MgSCU・7HQ0.5,FeSOq盯鱼。44.68,Ca(NO3)2*4H2O0.014,蒸溜水lOOOmLo固体9K培养基:在上述培养基中加入1%〜2%水洗琼脂。7.2实验方法及步骤7.2.1培养基成分及配制9K培养基的配制方法:按配方比例依次准确地称取药品,将所称药品（除硫酸亚铁外）放入烧杯中,加水搅匀,加热使其溶解。待完全溶解后,冷却，用硫酸调pH值为2,用蒸懈水定容。奇压蒸汽121C灭菌
6、20min,同时在紫外灯F照射硫酸亚铁30min火菌。火菌后将硫酸亚佚加入培养基中。固体9K培养基的配制方法：在培养基中加入1.2%经紫外灭菌30minJu的琼脂。7.2.2富集培养实验方法：用移液管移取5mL经无菌水稀释的样品液体上淸液,放入含有约120mL培养基的250mL的锥形瓶中，使用封口膜封闭瓶口,作好标记,于30°C,150r/min条件下摇床中恒温培养；培养7〜9d・待培养液中有混浊后，便得到增殖菌液。7.2.3菌株的分离纯化将9KI古I体培养堪B于121°C髙温火歯20mm,然后在无菌净化匸作台上于无菌的条件下倾倒平板约平板的1/3〜2/3,静置至培养基凝固。用接种环
7、在无菌条件卜挑取少许增殖培养液于平板上划线，30°C培养7〜9d・观察细菌生长情况.经多次划线分离,直接得到单菌落。分离出的单菌落特征一致,并且革兰氏染色后显微观察到的菌体形态、大小、革兰氏阴性和阳性一致,方可认为纯菌落,选择每份样品中生长情况最好的纯菌落编号,作好标记，全部保藏于4°C冰箱中。7.2.4株的初筛将分离得到的菌种右：•无菌的条件卜接种金仃约120mL培养基的250mL锥形瓶中，在30*0,150r/min的条件下进行恒温培养3〜5d,备用。在培养基中加入5%的火菌后的高硫煤,在灭菌后的该发酵液中加入10%的菌液,作好标记，培养7〜9d。待培养完成后，用无菌接种环将该细
8、菌在无菌的固体菇养基上划线,作好标记。将接种的平板倒置于恒温培养箱中,30“C条件卜•恒温培养。待平板上形成菌落后，再培养1〜2d,然后在无菌操作台上进行无菌接种。每种细菌只选-个生长旺盛的菌株，用接种环将该细菌接种于含有固体培养基的斜而上或液体培养基中,作好标记。将斜血或液体培养堆移入恒温培养箱或摇床中30°C条件下培养1〜2d,待斜曲生长出细曲后将斜血移入冰箱中4°C保存。7.2.5菌株的复筛取煤样10g加入到100mL菌液中，调整pH值到2.0,在30T.150r/min条件下进行恒温摇床恒温培•养20d,每隔一天取样，测疋煤中硫含量。7.2.6菌种鉴定选择脱硫效率最好的菌种,
9、通过观察菌体菌落形态特征，检测生长特性和生理生化特征，对所选菌种进行初步鉴运。具体方法见第四章。7.3结果与讨论7.3.1分离纯化的结果样品经平板划线分离得到DTT（大同煤矿上样）DTS（大同煤矿矿并水样）HFS（化肥厂水样）DST（东升庙硫铁矿上样）DSS（东升庙硫铁矿矿井水样）TYS（炭窑口硫铁矿矿井水样）HSYT（五大连池火山I」石样）7株纯菌落。7.3.2初筛的脱硫菌株经初筛发现纯化得到DTT（大同煤矿土样）DTS（大同煤矿矿井水样）HFS（化肥厂
