1ABO血型鉴定操作规程

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1、ABO血型鉴定操作规程1・目的:定性鉴定患者ABO血型2.适用范适用于献血员筛查、临床检测和血液制品检测3.方法及原理：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及0型四种。A型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原，AB型红细胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。可用已知的抗A、抗B试剂血清鉴定红细胞上有无对应的A抗原/B抗原（正定型），采用己知A型红细胞和B行红细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B抗体（反

2、定型），必须从正定型和反定型两项试验来确定样本的ABO血型。4.试剂与设备4.1试剂抗-A、抗-B定型试剂（单克隆抗体）；0.9%生理盐水；2%—5%A、B和0型试剂红细胞悬液4.2试剂组成试剂1：抗A分型试剂（蓝色），效价1：128,2°C-8°C避光保存，室温放置不宜过久。试剂2：抗B分型试剂（黄色）,效价1：128,2°C-8°C避光保存，室温放置不宜过久。试剂3：5%A、B及0型红细胞盐水悬液，自制。配制方法：分别采取已知A、B、0三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，以压积红细胞配成不同浓度的红细胞悬液。红细胞悬液的配制悬液浓度（％

3、）压积红细胞（滴）盐水（滴）212ml(40)510.8ml(16)1010.4ml(8)2010.2ml(4)为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取3个或以上的健康成人血液，按A、B、0型分别混合后，按上法制备。4.3设备透明光洁试管、显微镜、血清学专用水平离心机5.样本采集与处理：5.1标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。5.2标木要求：5.2.1抗凝剂：如用抗凝血，多主张用EDTAK2（mg/dL）抗凝。5.2.2手指血作血型检测时，最少样品量为lOOul,如手指有冻疮，则主张采耳垂血。5・3标本储存：2小时内完成实验，

4、室温放置下不超过8小时，4°C-8°C,保存不超过48小时。5.4.标本运输：室温运输5.5.标木拒收标准：细菌污染、溶血标木不能作测定。6.操作步骤：3.1取洁净小试管（内径1OmmX60mm）2支，分别标上A、B字样，用滴管分别向A管滴加抗A分型试剂1滴。向B管滴加抗B分型试剂1滴。向A、B管各滴加待检血样的5%红细胞悬液各1滴，混合。6.2另取洁净小试管（内径10mmX60mm）3支，分别标明A、B和0细胞。用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和0型5%红细胞悬液1滴，混合。4.3摇匀后以1000转/分的速

5、度离心1分钟判定结果。5.结果判断：4.1先以肉眼观察上清液是否有无溶血现象，然后轻轻摇动试管，使沉于管底的细胞扣悬浮，检查有无凝集块，观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。7.2溶血或凝集都判定为阳性结果7.3凝集强度判断标准：4+=红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3+=红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。2+=红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。1+=肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。土二镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。MF=混合凝集外观是指镜下可见少数红细

6、胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布。—表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。7.5按下表报告受检者红细胞ABO血型ABO血型正反定型结果抗—A抗—B抗一A+B血型A细胞B细胞0细胞+—+A—+——++B+———0++—+++AB—注+为凝集；-为不凝集5.干扰因素：8.1冷凝集和自身凝集现象&2血浆成分异常3.3抗体减弱或丢失4.4抗原减弱或变异8.5亚型9•超出范围结果处理：9.1红细胞自凝：冷凝集系增高是最为常见原因。应用37°C-40°C的生理盐水洗涤红细胞可去除红细胞表面附着的导致红细胞凝集的冷集素。5.2正反定型结果不一致原

7、因9.2.1分型血清效价太低、亲和力不强。如抗一A血清效价不高，可将A亚型误定为0型，AB型误定为B型。9.2.2红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例则不适当，使反应不明显，误判为阴性反应。4.2.3受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于白血病或恶性肿瘤）以及类B或cisAB等。9.2.4受检者血清中蛋口紊乱（高球蛋口血症），或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。9.2.5受检者血清中缺乏应有的抗一A和抗一B抗体，如丙种球蛋白缺乏症。9.2.6各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集，部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应

8、的抗体。6.2.7由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。9.2.9血清中有意外抗体，如自身抗一I,常引起干扰。9.2.9老年人血清中抗体水平大幅度下降。9.3正反定型