abo血型鉴定操作规程

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1、1.0原理ABO血型鉴定操作规程2.03.04.05.05.15.26.06.16.26.36.46.56.66.77.07.1根据红细胞上和血清（或血浆）中有无A抗原和（或）B抗原及其抗体，将血型分为A型、B型、AB型及O型。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定ABO血型。正定型正定是指用已知抗-A、抗-B血清来检测受检红细胞上有无相应的A抗原和（或）B抗原；反定型反定是指用已知A1型、B型红细胞来检测受检血清（或血浆）中有无相应的抗-A和（或）抗-B。原始样品要求5mL静脉全血。样品容器和添加剂真空试管，EDTA.K2

2、抗凝/普通试管，不抗凝。检测环境要求温度：18℃～27℃，湿度：30%～70%。所需材料和设备设备普通离心机、免疫血液学离心机、显微镜、恒温水箱、定时器。材料抗-A、抗-B血清、ABO标准抗原红细胞试剂、移液器、加样吸头、生理盐水（NS）、干净空试管。检测操作过程将受检标本以1000g离心5min，使标本血浆/血清与红细胞分离，吸取红细胞，用NS洗涤三次后，配成3%～5%红细胞悬液。取6支小试管，分别标记“-A”、“-B”、“自身”、“Ac”、“Bc”、“Oc”。在“-A”、“-B”管中分别加入抗-A和抗-B血清各50L，其余管加入

3、受检血浆/血清各100L。在“-A”、“-B”、“自身”管中加入受检者3%～5%红细胞悬液各50L，摇匀。在“Ac”、“Bc”、“Oc”管中分别加入A1、B、O红细胞试剂各50L，摇匀。1000g离心15sec，轻轻悬浮红细胞，观察结果并记录。根据实验需要，除室温下观察结果外，另可增加在4℃、37℃下观察结果。结果判断凝集强度判断标准见表1。表1凝集强度判断标准表凝集强度4+3+2+1+±-或θMFpHH判断标准红细胞凝集成一大块，液体背景透明，无游离红细胞数个大凝集块，液体背景透明，无游离红细胞有很多小凝集块，液体背景透明，无游

4、离红细胞有许多很小的凝集块，肉眼可见，液体背景不透明，有游离红细胞微小的凝集块，肉眼很难看清，需要用显微镜观察无凝集，无溶血，全是游离红细胞混合凝集外观，镜下可见少数红细胞凝集，而大部分是游离红细胞部分溶血完全溶血7.2ABO血型结果判断见表2：正定型抗-A血清血抗-B血清血Ac表22血型结果判断表反定型定BcOc自身对照血型＋――＋―＋―＋―＋＋―＋―＋―――――――――ABOAB7.37.48.09.010.0注：“＋”表示凝集或溶血；“―”表示不凝集。正反定型不一致、ABO抗原减弱、抗-A或抗-B减弱、

5、O细胞凝集时，排除人为操作错误后，执行《疑难血型鉴定操作规程》进行最终确认。根据上述判断标准，作出结论并记录在《免疫血液学检查实验记录》。结果报告根据实验结果，打印《免疫血液学实验报告》。报告的形式为：A型/B型/O型/AB型。实验结果解释实验结果为A型、B型、AB型，O型，说明受检者ABO血型分别属于A型、B型、AB型，O型。红细胞上分别有A抗原、B抗原、皆有A抗原和B抗原、皆无A抗原和B抗原；血浆中分别有抗-B、抗-A、抗-AB、皆无抗-A(B)。质量控制当受检标本与正、反定型试剂反应，凝集强度少于2+时，取标准抗-A、抗-B或

6、A、B、O红细胞与正、反定型试剂反应，以验证试剂效能是否下降。11.011.111.211.311.411.511.611.711.8注意事项试管必须清洁、干燥，防止溶血。加样顺序一般先加血清，再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。分型血清效价太低，抗原抗体比例不适当，可使反应不明显误判为阴性反应。用立即试管法可能不能测出亚型（如AX），需延长作用时间。观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于亚型、类B或cisAB的发现。各种原因引起的红细胞溶解，容易误判为不凝集；部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体，也会造

7、成不凝集。受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（多见于白血病或恶性肿瘤）以及类B或cisAB等，易被误判为不凝集。ABO正反定型不一致常见原因11.8.1分型血清效价太低，亲和力不强。11.8.2漏加、错加试剂或标本，试剂被污染或失效。11.8.3红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显误判为阴性结果。11.8.4受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（多见于白血病或恶性肿瘤）以及类B或cisAB等。11.8.5受检者血清蛋白紊乱（高球蛋白血症）或实验温度过高，常引起细胞呈缗钱状排列。11.8.6

8、受检者血清中缺乏应有的抗-A或抗-B，如丙种球蛋白缺乏症。11.8.7各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集；部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。11.8.8由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。11