液相色谱柱基础知识

《液相色谱柱基础知识》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、Waters中国有限公司培训中心液相色谱教程(四)液相色谱柱基础知识Waters中国有限公司培训中心液相色谱柱基础知识(1)色谱柱及其填料高效液相色谱柱简介°色谱柱是一根填满填料的管子°柱管的材料(塑料,玻璃,不锈钢…)和尺寸(内径,长短)不尽相同°管内的填料更是种类繁多,主要分为两大类–硅胶基质–聚合物基质°色谱柱的性能主要取决于填料的性质和填充技术©2004WatersCorporation硅胶的结构氢硅氧°无定形的多孔基质－硅原子与氧原子彼此结合形成“硅氧键”=(Si–O–Si)©2004WatersCorporation液相色谱填料的合成(1)°传统

2、硅胶颗粒基质°合成步骤：–1.合成硅胶基质–2.键合配体(键合相)–3.端基封口PolyethoxysilaneTetraethoxysilane(PEOS)(TEOS)©2004WatersCorporation未键合的硅胶颗粒:孔表面注意:表面硅醇基和微孔©2004WatersCorporation液相色谱填料的合成（2）键合相(配体)：C18端基封口基团°合成步骤：残留硅羟基1.合成硅胶基质2.键合配体(键合相)3.端基封口硅胶基质©2004WatersCorporation不同硅胶的制作过程°硅酸钠沉淀：(无定形颗粒)-µBondapak™硅酸钠聚合

3、成硅酸(硅胶)，之后研磨成小颗粒°“SolGel”1过程:(球形颗粒)-Nova-Pak®胶态硅球被熔融入色谱颗粒中°“SilGel”1过程:(球形颗粒)-Symmetry®纯硅烷聚合形成色谱颗粒©2004WatersCorporation硅胶颗粒技术的沿革°六十年代薄膜无孔填料(表面积很低<50m2/g--Corasil)°七十年代无定形多孔填料10µm(WatersµBondapak™)°八十年代球形填料5µm(WatersSpherisorb®及WatersNova-Pak®)°1995年高纯球形填料3-5µm(WatersSymmetry)°2000

4、年无机硅胶和有机硅胶杂化填料-WatersXterra3.5µ,5µm°2004年小颗粒(1.7µm)杂化填料-WatersBEH（UPLC专用）©2004WatersCorporation对色谱柱填料的了解(一)°平均颗粒度，颗粒度分布–颗粒度°颗粒度越小：柱效越高(传质好，涡流扩散小)柱压越高(渗透性差)–颗粒分布°颗粒分布越宽:柱效低(渗透性差)–颗粒形状°球型:柱效高、重现性好、柱床结构均匀°无定型：柱床结构不均匀,流动相线性速度不均匀谱带扩展©2004WatersCorporation硅胶颗粒的形状°不规则形状(Irregular)–大硅胶颗粒研磨

5、，筛分–颗粒尺寸和表面积限制°球形（Spherical）–目前流行的分析填料–更好的性能，重现性©2004WatersCorporation对色谱柱填料的了解(二)°键合相化学–影响化合物的分离度：α–不同键合相对不同种类的化合物分离不同–可能导致色谱的分离机理不同–如：C18、C8、CN©2004WatersCorporation键合相色谱柱°以硅胶为基质，通过化学键合方式把碳十八、碳八、胺基等基团联在基质上，作为固定相°优点∶–固定相稳定，不易流失–应用广泛，可使用多种溶剂–消除硅羟基的不良影响°缺点∶–pH值不能小于2(键合相水解)–同样填料，各种牌号

6、色谱柱不尽相同©2004WatersCorporation带有内嵌极性配体的色谱填料°WatersSymmetryShieldRP18…PolarOSiGroupCHCH33内嵌极性基团配体(由一步合成过程而来)OSiCHCH33传统直链烷基配体©2004WatersCorporation对色谱柱填料的了解(三)°填料的端基封口–封口残余硅羟基–减少不可逆吸附或拖尾–增加碳含量（0.1%-1%）©2004WatersCorporation残基处理的效果①抗坏血酸②烟酰胺③对氨基苯甲酸④哌咯西叮⑤核黄素⑥苯酚⑦盐酸硫胺NovaPakC18未封口C18©2004

7、WatersCorporation对色谱柱填料的了解(四)°含碳量–含碳量越高，k'值越大（固定相传质效应增加）°高含碳量–有利于不易保留的化合物的分离–水解稳定性好，重现性好–有利于极性化合物的拖尾改善°低含碳量–有利于分析中性及碱性化合物–降低溶剂损耗©2004WatersCorporation不同色谱柱的含碳量色谱柱C%k'苊(50/50的乙腈/水)SymmetryC181917ZorbaxODS1715.7LiChrosorbRP-181510.3SymmetryC81212.5ResolveC-181212.4UltrasphereODS1111.

8、3PartisilODS-31112.0µBondp