成骨细胞体外培养研究进展

《成骨细胞体外培养研究进展》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、万方数据第28卷第4期山东中医药大学学报v01．28，No．4至QQ垒堡Z旦』型旦!丝堡墅型型里!!堕些些!!曼垦量!垡鱼曼!!型』坚!；!鱼Q垒·综述·成骨细胞体外培养研究进展徐展望，许波，李军(山东中医药大学附属医院，山东济南250011)[关键词]成骨细胞；体外培养；中药[中图分类号]R68[文献标识码]A[文章编号]1007—659x(2004)04—0313—03成骨细胞起源于间充质的骨祖细胞或称前成骨细胞(osteoprogenitorcell)。骨祖细胞大致可分为两类：定向骨祖细胞(deteminedoSt∞prog

2、enitorcell，DOPC)和可诱导骨祖细胞(inducibleosteoprogenitorcell，IOPC)。在生理状态下DOPC为成骨细胞的主要来源，在骨折、脱钙骨基质修复骨缺损等病理状态下，IOPC也有很重要的作用。目前培养成功的成骨细胞大多起源于D()PC。现就成骨细胞的研究进展作一介绍。1成骨细胞的来源1．1骨国内外文献报道动物(大鼠、小鼠、鸡、兔)、人的胚胎颅骨或新生动物的颅骨为成骨细胞的常用来源。近有学者尝试用去卵巢山羊的颅骨分离成骨细胞，结果表明所培养的细胞具有典型的成骨细胞的形态特征、活性及发生钙化的功能

3、u，2j。最近又建立了用成熟大鼠的颅骨及生长期的大鼠的长骨分离培养成骨细胞的方法。王海彬等【3~5J取人松质骨建立成骨细胞体外培养模型并得到了大量纯化的成骨细胞。黄洁等【6，7J选用成年雌性大鼠松质骨在较短的时间内得到较多数量的成骨细胞。1．2骨外膜Vacanti等例1993年从新生小牛肩胛骨骨膜中分离出成骨细胞并种植到多孔聚羟乙酸支架上，7～10d后成骨细胞发生增殖；又于1994年【9J从胎牛肱骨骨膜上分离出成骨细胞种植到聚合物支架上并[收稿日期]2004．3—12[作者简介]徐展望(1960一)，男，山东济南人，副教授，研究方

4、向：骨与关节损伤的临床研究。植入大鼠体内，最终形成带血管蒂的小梁骨。张超等110'1lJ用胶原酶短时预消化法从取自新西兰兔胫骨上端内侧面骨膜上短时间内得到高纯度的成骨细胞。从研究中可知，来源于骨膜的细胞具有很强的传代繁殖和定向分化为成骨细胞的能力。1．3骨髓骨髓分造血和基质两大系统，其成骨能力来源于基质。骨髓基质含有能分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞或肌细胞的前体细胞群，称为骨髓基质细胞(marrowstoHnalceUMSCS)或间充质干细胞，这类细胞具有强的增殖能力和多分化潜能。韩君等u2J分离成年大鼠骨髓基质细胞进行培养，

5、用Dex、AA、B—GP作骨诱导剂，证实可向成骨细胞转化，表现为ALP活性增高和形成钙化沉积。张银刚等u3J采用胎兔长管骨骨髓细胞进行体外培养，证明其有骨细胞系特性，可作为修复骨缺损的种子细胞。Locklin等【14J研究证明，地塞米松和转化生长因子(TGF)抑制骨髓基质细胞增殖但提高ALP活性，表明二者可导向成骨细胞转化。金丹等l”】在实验中观察到bFGF可促进骨髓基质细胞的增殖，vitC可促进其分化。骨髓基质细胞有取材方便、机体损伤小、易于临床应用的特点，适于用作骨组织工程细胞的来源。2成骨细胞的体外分离及培养方法的研究进展许

6、永华等【16J取兔双侧胫骨骨膜，分别采用原法分离细胞及新法分离细胞，即先用0．1％胶原酶消化1h(37℃)离心后，再用0．1％ED，rA与0．25％胰蛋白酶等量混合液消化3min，低速离心收集细胞后接种。结果表明，原分离法对成骨细胞破坏程313万方数据2004年7月山东中医药大学学报第28卷第4期度大，培养成活率仅为12．5％，而新分离方法对成骨细胞破坏甚微，培养存活率可达到87．5％。丁焕文等[17，18]参照Ishaug和Liberrnan的方法并加以改进，用含0．1％的胶原酶、0．05％胰蛋白酶、5僦l几EDTA的等渗盐溶液

7、，以Tris缓冲氯化氨溶红细胞液溶解红细胞，反复5次消化新生l～3d小白鼠额、顶骨得5群细胞，分别接种培养，经ALP染色观察，第一群细胞ALP染色细胞仅为60％，第2～5群细胞ALP染色呈强阳性，占95％以上。说明第1群细胞中混杂的成纤维细胞、破骨细胞较多。作者根据Sandi的研究结果(骨组织中各种细胞耐受消化酶的能力依次为成骨细胞>骨生成细胞>破骨细胞>成纤维细胞)认为，本实验中成纤维细胞、破骨细胞、骨生成细胞在消化中首先脱落存在于第l群细胞中，而以后连续消化所得第2～5群细胞以成骨细胞为主，是本方法分离成骨细胞的理论根据。林清

8、泉等119，20J建立了胶原酶阶梯消化法进行鼠颅骨体外培养的生物模型。先用l％的I型胶原酶在37℃水温中振荡消化15min，再先后以0．5％、0．1％I型胶原酶同上法处理1．5h。最后将成骨细胞纯化、鉴定。结果示所培养的细胞具有典型的成骨细胞特性，